[发明专利]螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法

摘要

本发明提供螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，主要采用反复冻融与超声破碎相结合的方法提取螺旋藻蛋白，胰蛋白酶水解螺旋藻蛋白,葡聚糖凝胶柱分离纯化,超滤离心管过滤,再采用三聚磷酸钠离子交联法等步骤制备螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒子。本发明得到的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒Y2-CS具有下述抗肿瘤活性：对人乳腺癌细胞MCF-7体外生长具有一定的抑制作用，并呈现一定的剂量关系，当浓度为250μg/mL时，最高抑制率可达26.05%.因而本发明得到的螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒有利于抗肿瘤保健食品和医药产品的开发利用。

主权项

螺旋藻多肽‑壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤： （1）取螺旋藻粉溶于Milli‑Q水中，常温下磁力搅拌，待其全部溶解后置于冰箱中冷冻中，再置于冰箱中解冻，如此反复冻融三次，然后，采用超声破碎方法，将螺旋藻壁破碎，使得蛋白质游离出来，将蛋白质置于冰浴中，最后，将获得的溶液离心，去除沉淀获得蛋白上清液, 再真空冷冻干燥，获得螺旋藻蛋白质粉；（2）以步骤（1）得到的螺旋藻蛋白质粉为基础, 配置质量浓度为1~5%的螺旋藻蛋白水溶液，加入水解酶进行水解，水解后，灭酶，冷却至室温后将水解液离心，取上清液，然后,经截留分子量为10 KD的超滤离心管过滤，滤液再经过5 KD、10 KD的超滤离心管过滤，即可获得分子量大小范围为<5 KD、5‑10 KD、>10 KD的螺旋藻多肽水解液；(3) 以步骤（2）得到的5‑10 KD的螺旋藻多肽水解液为基础, 使用葡聚糖凝胶Sephadex G‑50分离纯化，并且按照出峰顺序共收集到三个峰，分别为第一个峰Y1，第二个峰Y2，第三个峰Y3；(4) 以步骤（3）得到的纯化的螺旋藻多肽水解液Y2为基础,再采用三聚磷酸钠（TPP）离子交联法即可得到螺旋藻多肽‑壳聚糖纳米粒Y2‑CS。