[发明专利]一种动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法

摘要

本发明公开了一种动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，属于间接竞争免疫法。本发明利用碳二亚胺法通过一步合成庆大霉素包被抗原，建立动物性食品中庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法。在芯片载体上固定庆大霉素包被抗原和内标物，然后在反应区内加入游离庆大霉素和庆大霉素单克隆抗体，游离的庆大霉素和芯片上固定的偶联物间进行竞争反应，待反应完毕后洗涤，再加入胶体金标记的二抗，反应完全洗涤后再加银增强显色剂，胶体金可将银原子催化成可目测的黑色银，通过扫描仪对图像进行扫描，最终可同时实现孔内半定量，定量检测。本发明方法可以快速准确测定动物源性食品中庆大霉素的残留量，灵敏度高，检测时间短，操作简单易行。

主权项

一种动物源性食品中残留庆大霉素的可视化蛋白芯片检测方法，其特征在于，该方法依次顺序包括如下步骤：(1)以牛血清白蛋白为空白对照，将牛血清白蛋白和庆大霉素‑载体蛋白偶联物通过生物芯片点样仪进行点样操作，点样板孔内分别加入10~50μL的牛血清白蛋白和10~50μL的庆大霉素‑载体蛋白偶联物，将点好的玻片放在4℃冰箱中固定过夜；(2)固定后每个反应孔内加入10~100μL 1~50mg/mL的牛血清白蛋白缓冲溶液对芯片进行封闭1~3h，然后PBST洗涤3‑4次，每次3‑15min；(3)在部分反应孔内加入10~100μL庆大霉素抗体和不同浓度的游离庆大霉素的标准溶液，在剩余反应孔内加入10~100μL庆大霉素抗体和样品溶液，所有反应孔20~37℃水浴反应1~3h，然后PBST洗涤3~4次，每次3~15min；(4)在每个反应孔内加入10~100μL胶体金标记羊抗鼠IgG，20~37℃水浴反应1~3h，然后PBST洗涤3~4次，每次3~15min；(5)在每个反应孔内加入10~100μL银增强显色剂，避光显色反应5~30min后，终止反应；(6)用CCD平板扫描仪进行图像扫描，根据不同浓度的庆大霉素包被抗原的灰度值信号，利用外标曲线法定量检测样品中庆大霉素的含量。