[发明专利]一种胞外生产重组β-环状糊精转移酶的生产方法无效
| 申请号： | 201210333961.5 | 申请日： | 2012-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN102796712A | 公开（公告）日： | 2012-11-28 |
| 发明（设计）人： | 黄遵锡;宋拓;李俊俊;唐湘华;许波;杨云娟;周峻沛 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 | 代理人： | 金耀生 |
| 地址： | 650000 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明是一种胞外生产重组β-环状糊精转移酶的生产方法。以大肠杆菌E.ColiBL21(DE3)(pET28(+)/cgt)为出发菌株；经种子培养阶段恒温培养摇床培养12小时，再经发酵阶段，按照1-2%的接种量接种菌株至200ml液体发酵培养基中，放于恒温摇床中发酵培养6-8个小时；当菌体OD600达到1.4-1.6时，加入乳糖诱导8-9个小时后过滤，所得液体即为β-环糊精葡萄糖基转移酶粗酶液。整个发酵时间18小时左右，胞外β-环绕糊精转移酶的环化酶活达到7U/ml以上。本发明采用两阶段控制工艺，实现了重组大肠杆菌胞外高效表达β-环糊精葡萄糖基转移酶。该工艺与现有的工艺相比步骤少，时间短，适合大规模生产，有效的胞外表达，大大的提高了生产效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 外生 重组 环状 糊精 转移酶 生产 方法 | ||
【主权项】：
一种胞外生产重组β‑环状糊精转移酶的生产方法，其特征在于采用发酵阶段和诱导阶段分开的生产工艺，具体步骤如下： （1）以大肠杆菌E. Coli BL21(DE3)(pET28(+)/cgt) 为出发菌株；（2）种子培养阶段：将上述菌株接入种子培养基，使用恒温培养摇床培养12小时，转速150rpm，温度35－37℃；（3）发酵阶段：按照1‑2%的接种量接种菌株至200ml液体发酵培养基中，放于恒温摇床中发酵培养，温度控制在35‑37℃，转速控制在150‑160rpm，培养6‑8个小时；（4）诱导阶段：当菌体OD600达到1.4‑1.6时，加入乳糖诱导，保证乳糖的终浓度为4－6g/L，温度保持在35‑37℃，转速提高至170‑180rpm，诱导8‑9个小时后过滤，所得液体即为β‑环糊精葡萄糖基转移酶粗酶液。
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