[发明专利]一种测定超氧化物歧化酶活性的方法

摘要

本发明提供了一种测定超氧化物歧化酶活性的方法。解决现有技术中测定超氧化物歧化酶活性的方法存在检测困难，准确度低，重现性差的技术问题。本方法是选用邻苯三酚碱性自氧化体系，结合紫外-可见分光光度法对超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除作用进行评价，通过检测与超氧阴离子作用后捕集剂2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜吸光度的变化计算出超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率，进而得出超氧化物歧化酶的活性。本方法具有重现性好，准确度高，操作简便的优点。

主权项

一种测定超氧化物歧化酶活性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤a、超氧阴离子产生体系缓冲溶液的配制配制pH值为8.5 ~9.5的30~50毫摩尔/升的碳酸氢铵缓冲溶液；步骤b、标准品的配制用步骤a中的碳酸氢铵缓冲溶液将标准品配成浓度为50微摩尔/升的标准溶液，所述的标准品为2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐；步骤c、对照品、样品和空白样品的制备对照品的制备：取40微升0.4~8毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升生理盐水，加入40微升50微摩尔/升的2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐，最后加入40微升1毫摩尔/升邻苯三酚水溶液，37℃反应8~20分钟后，作为对照品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；样品的制备：取40微升0.4~8毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升超氧化物歧化酶溶液，加入40微升50微摩尔/升的2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐，最后加入40微升1毫摩尔/升邻苯三酚水溶液，37℃反应8~20分钟后，作为样品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；空白样品的制备：取40微升0.4~8毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升超氧化物歧化酶溶液，加入40微升50微摩尔/升的2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐，最后加入40微升水溶液，37℃反应8~20分钟后，作为空白样品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；步骤d、对照品、样品和空白样品的检测设定紫外‑可见检测波长为450纳米，在内置紫外可见分光光度计的酶标仪中对步骤c中制备的对照品、样品和空白样品进行测定，得到对照品、样品和空白 样品的吸光度值A对照品、A样品和A空白样品； 步骤e、超氧化物歧化酶的活性的计算超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率按照以下公式计算：I样品 = [A对照品 ‑（A样品 ‑ A空白样品）]/ A对照品 × 100%式中，I为超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率；A对照品为对照品中2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；A样品为样品中2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；A空白样品为空白样品中2‑(4‑碘苯)‑3‑(4‑硝基苯)‑5‑(2'4‑二磺基苯)‑2H‑四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；超氧化物歧化酶活性的计算公式如下：超氧化物歧化酶活性=I / ( 1 – I ) 式中，I为超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率；超氧化物歧化酶活性单位为U。