[发明专利]碱性蛋白酶法从肠粘膜提取高纯肝素钠的工艺

摘要

本发明涉及肝素钠生产技术领域，提供了一种碱性蛋白酶法从肠粘膜提取高纯肝素钠的工艺。本发明主要步骤为酶解、吸附、洗涤、洗脱、沉淀、重溶再沉淀和干燥。本发明生产周期短，产品收率高，生产一亿国际单位肝素钠粗品只需1600根左右猪小肠；减少了肠渣和废水的排放，利于环保；增加了重溶再沉淀步骤，能有效解决高浓度的酒精和洗脱液容易形成盐结晶混在肝素钠产品中导致产品纯度较低的问题，产品纯度高，肝素钠的效价＞130U/mg。

主权项

一种碱性蛋白酶法从肠粘膜提取高纯肝素钠的工艺，其特征在于：所述的工艺步骤如下：（1）酶解：将猪小肠粘膜浆液加入酶解罐，猪小肠粘膜浆液为猪小肠粘膜：水=1: 2.5‑4的重量比的混合物，向酶解罐中加入盐度21°‑24°的氯化钠溶液调节酶解罐中料液的盐度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5；接着按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在53±3℃，盐度4.2±0.2°，pH 7.0±0.5保持3±0.5小时；最后升温至85‑88℃，保持20‑25min得酶解液，过滤去残渣；（2）吸附：将酶解液输入吸附罐，降温至57±3℃，加水调节盐度至3.0±0.5°，控制pH 7.0‑7.5，按每1000L酶解液加3‑8kg的树脂量，向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂，搅拌吸附6‑8小时后，收集树脂；（3）洗涤：将收集的树脂用水洗涤至pH为中性，再将树脂放入盐度4±1°、温度55‑60℃的氯化钠溶液，搅拌至少1小时进行洗涤，其中，树脂：氯化钠溶液=1:1.3‑1.7（w/v）；（4）洗脱：将步骤（3）洗涤后的树脂倒入洗脱罐中进行两次洗脱，其中，第一次洗脱为：将树脂加入到盐度为21±1°、温度55‑60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液=1:1‑1.4（w/v）；第二次洗脱为：将第一次洗脱后的树脂加入到盐度为21±1°、温度55‑60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液=1:0.8‑1.2（w/v）；合并两次收集的洗脱液；（5）沉淀：将步骤（4）收集到的洗脱液倒入沉淀罐中，搅拌条件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°‑60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物；（6）重溶再沉淀：将沉淀物：水=1:8‑10的重量比混合，充分溶解形成沉淀物溶液，向沉淀物溶液中加入肠衣专用盐，搅拌均匀，肠衣专用盐的用量为沉淀物溶液质量的1‑3%；再加入酒精度85±5°的酒精再次沉淀，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°‑60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物；（7）干燥：步骤（6）收集的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精进行脱水1‑3小时，滤干后做烘干处理即得肝素钠产品。