[发明专利]一种人脐静脉内皮细胞HUVEC的分离培养及传代方法

摘要

本发明涉及一种人脐静脉内皮细胞HUVEC的分离、培养与传代方法，属于生物技术领域。内容包括：1)HUVEC的分离。取新鲜脐带，用含双抗的无菌PBS溶液洗净，加入胶原酶37℃水浴消化，消化液离心后，加入M199培养基，转入明胶包被好的培养瓶中，于C02培养箱在37℃培养。2)HUVEC的培养：HUVEC细胞在37℃培养24小时后，倒掉培养基，并用PBS溶液清洗，加入新鲜的M199培养基；以后每2天换一次培养基，一般培养5-7天可传代。3)HUVEC的传代：倒掉培养基，用PBS溶液清洗，加入消化液消化细胞，一旦细胞变圆，即加入含血清的DMEM培养基终止反应，将所消化的细胞离心，加入新鲜培养基，传代2-3代的HUVEC用于实验。本发明分离得到的HUVEC，经济实用，简便易行，有利于获得所需的体外实验模型细胞。

主权项

一种人脐静脉内皮细胞HUVEC的分离方法，包括了以下步骤：1)取当天新生儿15‑20cm长的新鲜脐带，放入无菌含双抗的PBS溶液中4℃储存。2)用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌含双抗的PBS溶液冲洗至流出液体中无可见血液。3)夹住脐带下端，加入15ml的胶原酶I型(1mg/ml)37℃水浴消化10‑15分钟。4)消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50ml无菌离心管中，用无菌含双抗PBS溶液冲洗脐带2‑3次。5)将收集液离心(2000转/分)5分钟。6)倒去上清，加入10ml M199培养基(含酚红、20％新生小牛血清、2mmol/L L‑谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素、100μg/ml血管内皮细胞生长因子‑肝素)，用弯管吹散细胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，于CO2培养箱在37℃培养。