[发明专利]补阳还五汤的鉴别和含量测定方法

摘要

本发明公开了补阳还五汤的质量控制方法，该方法提供了鉴别方法和高效液相色谱法测定药物中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素成分的含量方法，提高后的质量标准能更好地控制药品的质量，本发明的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现体现药品安全有效、质量可控。

主权项

一种补阳还五汤的鉴别和含量测定方法，所述补阳还五汤是由如下原料及方法制备，取黄芪120g，当归6g，赤芍5g，川芎3g、红花3g、桃仁3g、地龙3g，于砂锅中加相当于饮片10倍量的水，浸泡30min，煎煮30min，煎煮2次，两层纱布过滤，合并滤液，浓缩，定容至300mL，制备成补阳还五汤，其特征在于包括以下鉴别方法和同时测定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素的含量测定方法：A.黄芪的TLC鉴别取上述补阳还五汤10mL，用水饱和的正丁醇振摇提取，每次20mL，提取3次，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，每次20mL，洗涤2次，弃去氨试液，取正丁醇提取液，水浴蒸干，残渣加蒸馏水3～5mL使之溶解，通过内径为1.5cm，长度为12cm的D101大孔树脂柱，加蒸馏水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，再用70%乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，用甲醇定容至5mL容量瓶，作为补阳还五汤供试品溶液；另精密称取黄芪对照药材4g，粉碎，按上述补阳还五汤供试品溶液的制备方法，自用水饱和的正丁醇振摇提取开始，制成黄芪对照药材溶液，再按补阳还五汤制备方法制备缺黄芪的补阳还五汤阴性样品，取缺黄芪的补阳还五汤阴性样品溶液20mL，同样方法制成缺黄芪的阴性对照溶液，分别吸取上述溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为30∶10∶1的二氯甲烷‑甲醇‑水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，于105℃加热显色，至斑点清晰，结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰；B.当归薄层色谱鉴别取上述补阳还五汤25ml，加热蒸干，加入乙醚10mL，加热回流提取30min，放冷滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另精密称取当归对照药材0.5g，粉碎，按上述补阳还五汤供试品溶液的制备方法，自用水饱和的正丁醇振摇提取开始，制成当归对照药材溶液，再按补阳还五汤制备方法制备缺当归的补阳还五汤阴性样品，取缺当归的补阳还五汤阴性样品溶液25mL，同样方法制成缺当归的阴性对照溶液，分别吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4∶1的正己烷‑乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置于波长为365nm的紫外光灯下检视，结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰；C.赤芍的TLC鉴别取上述补阳还五汤30mL，加热蒸干，加入70%甲醇20mL，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另精 密称取赤芍对照药材0.5g，粉碎，按上述补阳还五汤供试品溶液的制备方法，自用水饱和的正丁醇振摇提取开始，制成赤芍对照药材溶液，再按补阳还五汤制备方法制备缺赤芍的补阳还五汤阴性样品，取缺赤芍的补阳还五汤阴性样品溶液20mL，同样方法制成缺赤芍的阴性对照溶液，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8∶1∶4的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加热显色，至斑点显色清晰，结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色的斑点，阴性对照无干扰；D.川芎的薄层色谱鉴别取上述补阳还五汤100mL，加热蒸干，加乙醚20mL，回流提取30min，滤过，蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml，使溶解，作为供试品溶液。另精密称取川芎药材1g，粉碎，按上述补阳还五汤供试品溶液的制备方法，自用水饱和的正丁醇振摇提取开始，制成川芎对照药材溶液，再按补阳还五汤制备方法制备缺川芎的补阳还五汤阴性样品，取缺川芎的补阳还五汤阴性样品溶液100mL，同样方法制备成缺川芎的阴性对照溶液，分别吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的石油醚‑乙酸乙酯为展开剂，石油醚温度为60~90℃，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视，结果，供试品溶液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照无干扰；所述同时测定补阳还五汤中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素的含量的方法：色谱条件色谱柱：直径和长度为250mm×4.6mm，5μm的HypersilODS2，流动相：乙腈‑0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，梯度洗脱顺序为0分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为8:92，,15分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为10:90，25分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为15:85，35分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为18:82，45分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为24:76，64分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为36:64，73分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为45:55，80分钟时，乙腈与0.1%磷酸水溶液的体积比为66:34，流速：1mL·min‑1，检测波长：260nm，柱温：30℃，进样量10μL，采样时间：80min，对照品溶液的制备:分别精密称取芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素对照品适量，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，配制成单个组分对照品母液，使每1mL分别含芍药苷1.954mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷1.728mg、槲皮素1.956mg，备用,分别精密量取单个组分对照品溶液，加甲醇配成每1mL分别含芍药苷0.1954mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.1728mg、槲皮素0.1956mg的混合对照品液,精密称取补阳还五汤20mL，水浴蒸干，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷至室温，再称定重量，加甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液，过0.45μm的微孔滤膜，含量测定：精密吸取对照品及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；按照补阳还五汤中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素含量计，不少于设定值为合格。