[发明专利]一种铁皮石斛组织培养一步成苗的方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛组织培养一步成苗的方法，该方法通过合理调配培养基中两种激素的比例和剂量，同时加入活性炭等辅料，使得铁皮石斛种子直接发育成幼苗，将幼苗转接到壮苗培养基之后，成活率达99.5%以上。本发明可将铁皮石斛组织培养的成苗时间缩短2个月，显著提高培养效率，降低经济成本，可作为铁皮石斛组培苗生产的重要方法。

主权项

一种铁皮石斛组织培养一步成苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备成苗培养基：以B5为基础培养基，每升B5培养基中添加0.1mg的6‑苄氨基嘌呤、0.3mg的α‑萘乙酸、2.0g的活性炭、3.5g的琼脂和30g的蔗糖，加热至沸腾，加热过程中搅拌，待琼脂完全溶解后，调节pH值至6.0，得成苗培养基；均匀地将成苗培养基分装于培养容器中，边分装边搅拌，避免活性炭沉底，分装完毕后加盖；培养容器加盖后，放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：121℃下灭菌20分钟，灭菌后取出培养容器，冷却后备用；（2）铁皮石斛果实灭菌：将铁皮石斛果实放入水中清洗干净；在无菌条件下，将铁皮石斛果实在体积百分比浓度为75%的乙醇溶液中浸泡1分钟，取出用无菌水清洗若干遍，放入体积百分比浓度为2%的次氯酸钠溶液灭菌10分钟，再用无菌水清洗若干遍，吸干水分后放入无菌培养皿中备用；（3）接种：解开铁皮石斛果实的果皮，把种子均匀地洒在成苗培养基表面，盖紧盖子；（4）培养：将完成接种的培养容器移入培养室，培养条件为：温度25℃，光照时间每天12小时，光照强度l500～2000lx，培养时间约为3个月，得到0.5‑1.0 cm的幼苗； （5）转接：首先配置壮苗培养基：每升B5培养基中添加0.5mg 的6‑苄氨基嘌呤、1.0mg的α‑萘乙酸、3.0g的活性炭、3.0g的琼脂和30g的蔗糖，加热至沸腾，加热过程中搅拌，待琼脂完全溶解后，调节pH值至6.0，得状苗培养基；然后将幼苗转接至壮苗培养基，继续培养，直至苗高5‑6cm时，移栽至大棚。