[发明专利]PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体构建

摘要

本发明公开了一种PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体的构建方法。全基因合成一段包括PiggyBac转座子转座必需的PB5’端与PB3’端的DNA序列，并且在PB5’末端和PB3’末端中间引入多克隆位点。以pSP72商业化质粒为基础完成PiggyBac骨架载体构建。再将LoxP锚定的新霉素抗性基因、绿色荧光蛋白基因（LoxP-NEO-LoxP-EGFP）以及牛α-actin启动子和牛A-FABP基因克隆到PiggyBac骨架载体多克隆位点中，最终构建完成PiggyBac-NEO-EGFP-actin-AFABP通用型表达载体。通过分离并转染牛成纤维细胞，表明通过上述方法构建的通用型表达载体可在成纤维细胞中实现高效转座，在很大程度上提高了目的基因的整合效率。可用于制备提高肉中多不饱和脂肪酸、增加瘦肉率等多种用途，具有很高的通用性。

主权项

一种PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A‑FABP通用载体的构建方法，其特征在于，通过全基因合成PiggyBac转座子载体转座所发生转座必需的PB5'碱基序列和PB3'碱基序列，并在两序列中间引入多克隆位点FseI、MluI、PacI、NotI、HindIII、BamHI、BstBI和AscI；在商业化质粒pSP72基础上完成PiggyBac转座子骨架载体构建；再将LoxP锚定的新霉素抗性基因（Neomycine/NEO）和绿色荧光蛋白基因（EGFP）以及α‑肌动蛋白启动子（α‑actin promoter）和牛A‑FABP基因克隆到多克隆位点FseI、MluI、PacI、NotI、HindIII、BamHI、BstBI和AscI中，最终构建完成PiggyBac‑NEO‑EGFP‑actin‑AFABP通用型表达载体。