[发明专利]一种蜡样芽孢杆菌电化学纳米免疫传感器的制备方法

摘要

本发明公开了一种蜡样芽孢杆菌电化学纳米免疫传感器的制备方法，提供一种灵敏度高、特异性强、快速定量的蜡样芽孢杆菌电化学纳米免疫传感器的制备方法。取壳聚糖溶液滴满玻碳电极表面，于45℃干燥3h；冷却至室温，浸于NaOH溶液中，用超纯水清洗掉NaOH溶液，浸于超纯水中；取出自然晾干后置于纳米金溶胶中；将纳米金电极置于纯化的蜡样芽孢杆菌单克隆抗体中自组装；再取硫堇/壳聚糖共聚物溶液滴加于单层纳米金修饰电极表面的中心，干燥后，用超纯水清洗；置于纳米金/辣根过氧化物酶溶液中自组装，超纯水冲洗后再置于纯化的蜡样芽孢杆菌单克隆抗体中自组装，置于牛血清白蛋白溶液中温育，清洗未结合的牛血清白蛋白，自然晾干。

主权项

一种蜡样芽孢杆菌电化学纳米免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）将玻碳电极预处理后，取质量百分比浓度为0.5%的壳聚糖溶液滴满处理后的玻碳电极表面，于45℃干燥3h使所述壳聚糖溶液形成包住玻碳电极的凝胶；（2）干燥后自然冷却至室温，再浸于浓度为1mo l/L的NaOH溶液中5min，用超纯水清洗掉NaOH溶液，之后浸于超纯水中30min使NaOH离子彻底进入水中；（3）取出自然晾干后置于纳米金溶胶中至少24h，得到纳米金电极；（4）将步骤（3）得到的纳米金电极置于纯化的蜡样芽孢杆菌单克隆抗体中4℃自组装至少24h，即得单层纳米金修饰电极；（5）再取硫堇/壳聚糖共聚物溶液滴加于上述单层纳米金修饰电极表面的中心，自然干燥后形成聚合物膜，用超纯水反复清洗所形成的聚合物膜至洗出水在600nm下无吸光值；然后置于纳米金/辣根过氧化物酶溶液中4℃自组装至少24h，之后，超纯水冲洗后再置于纯化的蜡样芽孢杆菌单克隆抗体中4℃自组装至少24h，最后置于浓度为1g/100mL的牛血清白蛋白溶液中37℃温育至少1h，以封闭非特异性位点，以含体积百分比为0.05%Tween‑20的磷酸缓冲液清洗未结合的牛血清白蛋白，自然晾干即得双层纳米金修饰的蜡样芽孢杆菌电化学纳米免疫传感器。