[发明专利]一种近红外生物荧光染料在活细胞成像中的应用

摘要

本发明公开了一种近红外生物荧光染料在活细胞成像中的应用；通过培养细胞、配制染料溶液、染色、成像，完成使用近红外生物荧光染料将活细胞成像；本发明使用近红外生物荧光染料染色可以减少光源对细胞及组织的损伤，降低自发荧光的干扰，染色更彻底；本发明使用的近红外荧光染料对线粒体或RNA染色具有特异性。

主权项

1.一种近红外生物荧光染料在活细胞成像的应用，其特征在于，应用方法包括以下步骤：1）细胞培养将细胞接种于共聚焦皿中，在37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中培养12~24h；其中，细胞培养液中含相应的培养基、10%体积百分数的胎牛血清、100μg/mL青霉素和100μg/mL链霉素；2）染料溶液的配制将近红外生物荧光染料用二甲亚砜配成5mM~10mM的染料溶液；3）染色向原细胞培养液中加入步骤2）得到的染料溶液，摇匀，使近红外生物荧光染料的最终浓度为500nM~5μM，得到原细胞培养液和染料溶液的混合液，在37℃、5%CO₂、饱和湿度中孵育细胞10分钟以上，将线粒体或RNA染色；4）成像移去步骤3）的混合液，用磷酸盐缓冲溶液冲洗细胞，之后加入新鲜的细胞培养液，在活细胞工作站中保持37℃、5%CO₂、饱和湿度，用激光共聚焦显微镜进行拍摄成像，激发波长为640nm；其中，所述近红外生物荧光染料具有式（I）结构：式中，Y、Y₁分别独立的为O、S或NR₁₁；Z为NR₇R₈或OR₉；R₁、R₂、R₇、R₈、R₉、R₁₁分别独立的为氢、烃基、醚基、取代烷基、酰基或芳基；R₃、R₅、R₆、R₁₀、R₁₂、R₁₃分别独立的为氢、低级烃基、低级烷氧基、氰基或卤素；R₄为氢、低级烃基、醚基、低级烷氧基、取代烷基、酰基、氰基、芳基或卤素；为阴离子。