[发明专利]超级细菌NDM和KPC基因双重荧光定量PCR检测方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种超级细菌NDM和KPC基因双重荧光定量PCR检测方法及其试剂盒，利用特异性设计的引物和探针，优化扩增体系和条件，能在同一体系同时完成KPC和NDM两个基因的检测，较单重荧光定量PCR更加高效、省时省力，本方法特异性好、重复性佳、灵敏性高，且可以利用已建立的标准曲线对未知样本进行定量分析。

主权项

一种超级细菌的双重荧光定量PCR检测方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）提取待检样本的DNA模板；（2）对DNA模板进行PCR扩增，所用引物和探针序列如下：NDM基因上游引物NDM‑F：TTGGCGATCTGGTTTTCC（SEQ ID NO.1），NDM基因下游引物NDM‑R：GGTTGATCTCCTGCTTGA（SEQ ID NO.2），NDM基因的探针NDM‑probe：TGGCAGCACACTTCCTATCTCG（SEQ ID NO.3），KPC基因上游引物KPC‑F：CGCAACTGTAAGTTACCG（SEQ ID NO.4），KPC基因下游引物KPC‑R：CATGCCTGTTGTCAGATA（SEQ ID NO.5），KPC基因的探针KPC‑probe：CCACTGTGCAGCTCATTCAAGG （SEQ ID NO.6）；所用探针标记的荧光基团互不相同；（3）结果分析：反应结束，根据待测样本的Ct值判断其是否为NDM、KPC基因阳性。