[发明专利]一种原位测定木质纤维生物质酶可及性的方法

摘要

本发明属于环境生物能源领域，涉及一种原位测定木质纤维生物质的纤维素酶可及性的方法。包含以下步骤：（1）标记木质纤维生物质样品的总的酶结合位点；（2）原位观测总的酶结合位点分布及数量，计算得样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针量；（3）释放总的酶结合位点；（4）将（3）的样品用木质素吸附蛋白封闭，标记样品中的纤维素酶结合位点，得到纤维素酶结合位点的分布、数量及样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针量；（5）比较步骤（4）和（2）的结果评价木质纤维生物质的纤维素酶可及性。本发明提供的方法能够原位观测和计数酶结合位点并实现可视化，从而直观地评价木质纤维生物质的酶可及性。

主权项

一种原位测定木质纤维生物质的纤维素酶可及性的方法，其特征在于：包含以下步骤：（1）向木质纤维生物质样品中加入初始探针浓度为Et的纤维小体荧光蛋白探针溶液，标记样品的总的酶结合位点；（2）用荧光显微镜原位观测和计数木质纤维生物样品上荧光标记的总的酶结合位点的分布及数量，用荧光光度计测定标记溶液的上清液中游离纤维小体荧光蛋白探针浓度Efa，与初始探针浓度Et相比较，采用差量法计算得样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针浓度Ea，并计算单位面积吸附的纤维小体荧光蛋白探针量Eua；（3）用洗脱液脱附样品上吸附的纤维小体荧光蛋白探针，释放总的酶结合位点；（4）将步骤（3）处理获得的样品用木质素吸附蛋白封闭后，用初始浓度为Et的纤维小体荧光蛋白探针溶液标记样品中的纤维素酶结合位点，再按照步骤（2）的操作过程，得到样品的纤维素酶结合位点的分布及数量，游离的纤维小体荧光蛋白探针浓度Efd，样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针浓度Ed，以及单位面积吸附的纤维小体荧光蛋白探针量Eud；（5）比较步骤（4）和（2）的结果，以二者的结果之差得到不可降解的酶结合位点的数量及单位面积吸附的纤维小体荧光蛋白探针量En，结合上述的酶结合位点及可降解的酶结合位点的分布、数量及吸附的纤维小体荧光蛋白探针浓度，评价木质纤维生物质的纤维素酶可及性。