[发明专利]一种分离恩拉霉素A和恩拉霉素B的方法

摘要

本发明公开了一种分离恩拉霉素A和恩拉霉素B的方法，包括如下步骤，步骤1，取含恩拉霉素A和恩拉霉素B的混合物进行溶解、；步骤2，将十八烷基反相键合硅胶层析填料用甲醇浸泡后装柱；步骤3，将步骤1中溶解液上样反相层析柱用4-6倍填料体积的磷酸二氢钠-磷酸水溶液洗脱；步骤4，采用含有32%-36%甲醇的磷酸二氢钠-磷酸水溶液对步骤3得到的含有恩拉霉素A和恩拉霉素B的反相层析柱进行洗脱；步骤5，逐步提高磷酸二氢钠-磷酸水溶液中甲醇含量至40%进行梯度洗脱；步骤6，采用含有40%-50%甲醇的磷酸二氢钠-磷酸水溶液对步骤4处理后的反相层析柱进行洗脱。该方法能够有效分离恩拉霉素A和恩拉霉素B。

主权项

一种分离恩拉霉素A和恩拉霉素B的方法，其包括如下步骤：步骤1，取含恩拉霉素A和恩拉霉素B的混合物进行溶解，溶解液为30%甲醇的盐酸水溶液，pH为3.0‑4.0；步骤2，将粒径为10‑50μm的十八烷基反相键合硅胶层析填料用甲醇浸泡后，装柱，再用含30%甲醇的pH4.0‑5.5的0.01‑0.05M磷酸二氢钠‑磷酸水溶液平衡层析柱后制成反相层析柱备用；步骤3，将步骤1中溶解液上样反相层析柱，上样量为1‑10mg混合物/mL填料体积，再用4‑6倍填料体积的步骤2中的磷酸二氢钠‑磷酸水溶液洗脱杂质，形成含有恩拉霉素A和恩拉霉素B的反相层析柱；步骤4，采用1‑3倍填料体积的含有32%‑36%甲醇的步骤2中的磷酸二氢钠‑磷酸水溶液对步骤3得到的含有恩拉霉素A和恩拉霉素B的反相层析柱进行洗脱，收集得含有恩拉霉素A的洗脱液A；步骤5，采用3‑6倍填料体积的步骤2中的磷酸二氢钠‑磷酸水溶液洗脱，逐步提高磷酸二氢钠‑磷酸水溶液中甲醇含量至40%进行梯度洗脱，弃洗脱液；步骤6，采用3‑8倍填料体积的含有40%‑50%甲醇的步骤2中的磷酸二氢钠‑磷酸水溶液对步骤4处理后的反相层析柱进行洗脱，收集得含有恩拉霉素B的洗脱液B。