[发明专利]一种地沟油快速检测试纸的制备方法

摘要

本发明提供一种地沟油快速检测试纸的制备方法，包括如下步骤：A）免疫彩色乳胶微球的制备；B）免疫彩色胶乳反应垫的制备；C）NC膜的制备；D）彩色胶乳试纸条的的组装。利用本发明制备的地沟油检测试纸检测灵敏度高，可以同时检测多个指标，为地沟油检测提供更全面、系统的检测方法，相对缩小检测成本；该检测试纸在常温下可保质两年，有效延长保质期并降低保存条件；非专业人士用该检测试纸即可完成全程检测，操作简单，有利于该法的推广和普及；整个检测过程最快可以在10min内完成，更适合于现场快速筛选。

主权项

一种地沟油快速检测试纸的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A）免疫彩色乳胶微球的制备：（a）彩色乳胶微球的预处理：分别取红色、黄色、蓝色、绿色四色乳胶微球溶液，所述乳胶微球的直径为100nm，变异系数＜10%，用80Hz超声波处理后，用超纯水调节浓度，离心，取沉淀用MES缓冲液清洗两次，得到洗好的乳胶，用预冷的MES缓冲液分别将EDC和NHS配置成溶液加入到所述洗好的乳胶中，在室温下缓慢混匀，孵育结束后离心，取沉淀用MES缓冲液清洗两次，得到乳胶微球溶液；（b）抗体标记：用MES缓冲液将鼠抗黄曲霉毒素单克隆抗体、鼠抗苯并芘单克隆抗体、鼠抗茴香胺单克隆抗体和鼠抗DBS单克隆抗体稀释，之后分别缓慢加入到用磁力搅拌器搅拌的红色、黄色、蓝色和绿色的所述乳胶微球溶液中，室温轻柔搅拌后用PBS离心洗涤，沉淀用PBS‑TBN溶解，80Hz超声波处理后，加入PBS‑TBN至标记前体积，置4℃保存备用；B）免疫彩色胶乳反应垫的制备：将玻璃纤维膜浸泡于反应垫处理液中，水浴处理后平铺于纱网上干燥3~4h，将标记后的彩色乳胶微球按照效价实验匹配的结果，以体积比为红：黄：蓝：绿=2：2：4：5混合均匀，按照每毫升乳胶溶液铺50cm²涂覆玻璃纤维膜，干燥16h后置4℃密封保存备用；C）NC膜的制备：将抗原黄曲霉毒素‑OVA，苯并芘‑OVA，茴香胺‑OVA和DBS‑OVA用包被缓冲液分别稀释至0.3、0.4、0.4和0.2mg/ml，用喷膜仪按1.0、0.8、0.8和1.5μl /cm分别喷涂于同一条NC膜上的不同区域作为检测线，每条检测线相距4‑10mm，将浓度为2.0mg/ml的兔抗鼠IgG用喷膜仪按0.5μl/cm喷涂于质控区作为质控线，用封闭液封闭NC反应膜，再用PBST洗脱，然后室温晾干备用；D）彩色胶乳试纸条的的组装：将样品垫放入处理液中处理后干燥备用，将干燥后的样品垫、反应垫、NC反应膜和吸水滤纸按顺序装配在PVC底板上，用带mark胶带绕背板覆盖在样品垫、反应垫及吸水滤纸上，然后用切条机切割成2‑10mm宽的试纸条，制成地沟油彩色胶乳微球免疫层析检测试纸条。