[发明专利]一种测定维生素B12含量的色谱方法

摘要

一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，包括以下步骤：（1）流动相制备；（2）对照品溶液制备；（3）供试样品溶液制备；（4）色谱条件设定；（5）进样检测。本发明通过选择新型流动相和与之配套的其他检测条件，实现直接对复杂基质保健食品中微量维生素B12含量的准确测定和计算，检测结果色谱峰形好，抗干扰能力强，满足实际测定要求。

主权项

一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，其特征在于包括以下步骤：（1）流动相制备：称取一定量的磷酸二氢钾，置于容量瓶中，加去离子水溶解后，加85%磷酸配制浓度为0.04 M、pH 为3.5±1.5 的磷酸钾盐缓冲溶液，将上述缓冲溶液与甲醇按照缓冲溶液：甲醇=69:31的体积比的混合均匀，制成流动相；（2）对照品溶液制备：采用USP标准品作为维生素B12对照品，精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01 mg/mL的储备液，每次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为1 μg/ml的标准工作溶液；（3）供试样品溶液制备：取适量待测样品，研成细粉，精密称定约含有25 μg维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25 mL流动相溶解，用力震摇，提取2分钟，用0.45 μm滤膜过滤；（4）色谱条件设定：a. 色谱柱：采用反相C18色谱柱，5 μm ，250 mm ×4.6 mm；b. 流速：0.5‑1.5 mL/min；c. 检测器及检测波长：二极管阵列检测器，波长为546 nm；d. 进样量：70‑150 μL；e. 柱温：25‑35 °C；（5）进样检测：通过供试样品与对照品的保留时间和溶液峰面积关系，按如下方程计算样品中维生素B12的含量：ω样= C对×A样×25/ A对×m样，其中ω样为待测样品中维生素B12的含量，单位为μg/g；C对为对照品标准浓度；A对为对照品标准溶液峰面积；A样为样品溶液峰面积；m样为样品的重量,单位为g。