[发明专利]一种使醋杆菌种富集钙的驯化培养方法

摘要

本发明提供了一种使醋杆菌种富集钙的驯化培养方法，该方法采用常用的巴氏醋杆菌，通过改变培养基配比和培养方法，使得现有的巴氏醋杆菌可以实现钙的富集，进而获得高钙含量的菌体和菌液，该菌体和菌液可以用于多种饲料添加剂中，应用到禽畜饲养中时可以大大提高畜禽体内的钙含量，促进畜禽的生长，改善禽畜肉类产品的品质。

主权项

一种使醋杆菌种富集钙的驯化培养方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）驯化初级菌液的制备取500ml三角瓶，每瓶装驯化培养液150ml；灭菌后在30±1℃和无菌条件下，向每个三角瓶中接入醋杆菌0.1g，将三角瓶密封，放入回旋式摇床中培养，转速90－110rpm，温度30±1℃，培养45小时结束即可获得驯化初级菌液；其中所述的驯化培养液为：牛肉膏4g，碳酸钙30g，磷酸二氢钙25g，玉米粉10g，无水氯化钙0.3g，磷酸二氢钾0.25g，玉米浆干粉5g，葡萄糖15g，加水1000ml后混合均匀既得；所述的醋杆菌选自中科院微生物研究所提供的巴氏醋杆菌，编号为：Accc10600或Accc 10112；（2）一级种子液的制备：取250ml三角瓶，每瓶装培养液100ml，灭菌后在30℃±1℃和无菌条件下，每个三角瓶接入步骤（1）中获得的驯化初级菌液10ml，将三角瓶密封，放入回旋式摇床中培养，转速每分钟120‑130转，温度30℃‑32℃，培养25‑30小时既得一级种子液；其中所述的培养液中各组分的重量百分比为：酪蛋白胨5％，牛肉膏5％，碳酸钙3％，磷酸氢钙2％，玉米粉2％，磷酸二氢钾0.3％，玉米浆干粉0.4％，葡萄糖2.3％，水80％；（3）种子罐培养菌种液的获得：将种子罐培养液加入到已经灭菌的种子罐中，然后通入蒸气加热，利用夹层蒸气加热到90℃‑95℃时改用直接蒸气加热，当种子罐中蒸气压力达到0.11‑0.12兆帕时，保温25‑30分钟即可达到灭菌效果；然后关闭蒸气，待种子罐降温至28℃‑30℃之间时，将步骤（2）中获得的一级种子液按照种子罐培养液重量1%的用量加入到种子罐中，然后盖好接种帽，开始无菌空气通风发酵，无菌空气用量为每100公斤培养液每分钟用无菌空气0.05‑0.1立方，PH值自然，转速每分钟120‑130转，发酵时间为25‑30小时，检测OD值应达到0.1毫升，OD600mm＝1即可停止发酵，获得种子罐培养菌种液；其中所述的种子罐培养液中各组分的重量百分比为：酪蛋白胨3％，牛肉膏3.5％，葡萄糖0.5％，酵母膏3％，碳酸钙2％，磷酸氢钙1％，玉米粉1％，磷酸二氢钾0.2％，玉米浆干粉0.2％，水85.6%；（4）发酵罐培养：将发酵罐培养液加入到已经灭菌的发酵罐中，通入蒸气加热，当发酵罐中蒸气压力达到0.11‑0.12兆帕时，温度121℃‑122℃时，保温30‑35分钟即可达到灭菌效果；然后向夹层通入自来水降温，当罐中温度降到30℃‑31℃时，无菌条件下接入发酵罐培养液重量3%的步骤（3）中获得的种子罐培养菌种液，接种时首先提高种子罐的罐压力，达到0.1兆帕，发酵罐罐压维持在0.05兆帕，打开接种管道的阀门将种子罐的菌种液直接输送到发酵罐中去，输送到上述定量的菌液后关闭接种管道阀门开始发酵；发酵温度30℃‑31℃，转速每分钟150转，通风量每100公斤发酵液每分钟通入无菌空气0.1立方米，ph自然，发酵时间 25‑30小时，检测OD值应达到0.1毫升，OD600mm＝1为合格，既得目标发酵菌液；其中所述的发酵罐培养液中各组分的重量百分比为：酪蛋白胨4％，牛肉膏3％，酵母膏2.5％，葡萄糖3％，碳酸钙5％，磷酸氢钙3.5％，玉米粉3％，磷酸二氢钾0.3％，玉米浆干粉0.7％，乳酸钠2％，水73％。