[发明专利]一种固相合成GLP-1类似物的方法

摘要

本发明涉及多肽固相合成领域，为解决固相合成GLP-1类似物过程中氨基酸顺序连接困难或不完全造成而产生性质非常相似的缺失肽和副产品，导致后续纯化的时不能分离副产品的问题，本发明提出一种固相合成GLP-1类似物的方法，本发明在难连位点采用了片段缩合方法和引入取代基的方法，提高了多肽合成的收率。

主权项

一种固相合成GLP‑1类似物的方法，其特征在于：所述的合成方法为以下步骤：（1）以Fmoc‑Rink Amide PEG MBHA Resin作为起始树脂，在DCM或DMF溶剂下在容器中溶胀； （2）在容器中加入脱保护试剂后，然后对脱保护后的树脂进行冲洗备用；（3）以Fmoc或者Boc氨基保护的氨基酸或者肽片段溶液作为中间原料，在DMF溶剂中加入活化剂对羧基预活化备用；（4）将活化后的Fmoc或者Boc保护的氨基酸或者肽片段溶液与步骤（2）得到的脱保护产物混合，进行缩合反应；（5）抽取步骤（4）的产物通过茚三酮监测缩合反应完成的程度，直到步骤（4）完成反应，然后对带有产物的固相树脂进行冲洗；（6）将步骤（5）的产物放入容器中，重复步骤（2）~（5），按照氨基酸序列从C端到N端的顺序进行新的氨基酸或者肽片段的缩合，最后，经过冲洗得到侧链全保护的GLP‑1类似物‑Rink Amide MBHA PEG固相树脂；（7）对步骤（6）得到的侧链全保护的GLP‑1类似物‑Rink Amide MBHA PEG 固相树脂进行脱保护和切割反应，然后采用冰乙醚沉淀、过滤得到GLP‑1类似物粗产品；（8）得到的GLP‑1类似物粗产品通过离子交换及反相高效液相色谱进行分离纯化，最后通过冷冻干燥，得到GLP‑1类似物产品。