[发明专利]检测莱克多巴胺的化学发光免疫检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种检测莱克多巴胺的化学发光免疫检测试剂盒，属于免疫学检测领域，本发明的试剂盒由包被有莱克多巴胺-载体蛋白交联复合物的不透明白色酶标板、莱克多巴胺标准品、莱克多巴胺-过氧化物酶标记抗体、发光底物液、浓缩缓冲液组成，所述莱克多巴胺-载体蛋白交联复合物是将莱克多巴胺与载体蛋白通过混合酸酐法或直接活化蛋白法偶联得到，浓缩缓冲液含有吐温-20缓冲液，本发明的试剂盒具有快速简便、灵敏度高、检测成本低、重复性好、高通量等优点，可用于动物尿液、血样、组织及内脏等样品中莱克多巴胺的残留量检测。

主权项

一种检测莱克多巴胺的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于由以下组分组成：(1)96孔不透明白色酶标板，12条×8孔，包被有莱克多巴胺‑人血清白蛋白交联复合物，用铝膜真空密封包装；(2)莱克多巴胺标准品溶液6瓶，浓度分别为：0μg/L、0.04μg/L、0.12μg/L、0.36μg/L、1.08μg/L、3.24μg/L；(3)莱克多巴胺‑辣根过氧化物酶标记抗体溶液，(4)发光底物A液为鲁米诺及增强剂，发光底物B液为尿素过氧化氢；(5)100倍浓缩缓冲液，使用前稀释100倍成为工作浓度缓冲液，其稀释后的工作浓度缓冲液为0.05mol/L PBST缓冲液，pH 7.4，含0.05％(v/v)Tween‑20；所述组分的制备为：莱克多巴胺半抗原的准备：将莱克多巴胺酸化，在4℃无光低温环境中与亚硝酸钠作用，生成含重氮基正离子的中间体，重氮化的莱克多巴胺作为半抗原，用于后面合成免疫抗原与包被抗原；人血清白蛋白‑莱克多巴胺包被抗原的合成：将莱克多巴胺与人血清白蛋白采用重氮化法进行偶联得到免疫抗原；莱克多巴胺‑过氧化物酶标记抗体的制备：将上述免疫抗原注入Balb/C小鼠体内，经多次加强免疫后，使其产生抗体血清，取出免疫后小鼠的脾细胞，加入离心管中混匀，将上述脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，在含有HAT溶液的96孔培养板中进行CO2培养，筛选阳性孔，然后利用有限稀释法得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，取健康Balb/C小鼠，腹腔注射灭菌液体石蜡1mL，7d后向腹腔注射上述杂交瘤细胞悬液1mL，7d后采集腹水，加等量液体石蜡稀释，加入二氧化硅粉末混匀，离心得澄清腹水，澄清腹水用辛酸‑硫酸铵法进行纯化，再经透析得到纯化的莱克多巴胺单克隆抗体，莱克多巴胺单克隆抗体与辣根过氧化物酶偶联，从而得到莱克多巴胺‑过氧化物酶标记抗体；包被有莱克多巴胺‑HSA交联复合物的不透明白色酶标板制备：用缓冲液将莱克多巴胺‑HSA交联复合物稀释后用于包被不透明白色酶标板的检测孔，4℃过夜后用PBST缓冲液洗涤，然后加入200μL封闭液，所述封闭液含2％(w/v)HSA的PBST，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后完成。