[发明专利]一种金钱松细胞的悬浮培养方法

摘要

本发明公开了一种金钱松细胞的悬浮培养方法，该方法包括如下步骤：愈伤组织的诱导培养→细胞的预培养→细胞的悬浮培养→细胞的继代培养。本发明通过采用对金钱松的愈伤组织进行细胞的悬浮培养，可实现大规模快速生产出有效成分含量高的金钱松细胞培养物。

主权项

一种金钱松细胞的悬浮培养方法，其特征在于包括如下步骤：（1）愈伤组织的诱导培养：选取落叶后生长健康、无病虫害的金钱松植株上的芽，剥去芽上的芽鳞片后将芽进行消毒处理，再将已消毒的芽接入固体培养基MS+6‑BA1.0～2.0 mg·L‑1+NAA0.5～4.0  mg·L‑1 +蔗糖20～50 g·L‑1 +琼脂5.0～7.0 g·L‑1中进行培养，培养温度10～30 °C、pH值为5.6～6.5、每天光照4～16小时、光照强度为1000～2000 lx；（2）细胞的预培养：将步骤（1）中获得的愈伤组织转接入液体培养基MS+6‑BA0.5～1.5 mg·L‑1+2、4‑D 1.0～4.0 mg·L‑1+KT 0～2.0 mg·L‑1+蔗糖20～50 g·L‑1 中进行5～8天的预培养；（3）细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的金钱松单个细胞或疏松细胞小聚集体，以20～50 g·L‑1的接种量转接到B5+6‑BA0.1～1.0 mg·L‑1+2、4‑D 2.0～5.0 mg·L‑1+KT 0.1～1.0 mg·L‑1+蔗糖20～50 g·L‑1的液体培养基中进行细胞的悬浮培养；（4）细胞的继代培养：在细胞悬浮培养了28～32天进行第一次继代培养，以后每隔15～25天继代一次；上述（2）、（3）、（4）步骤中金钱松细胞的液体培养条件均为温度15～28°C，pH值4.0~7.0，每天光照6～12小时，光照强度为1000～1500 lx，摇床转速为110～140r·min‑1。