[发明专利]一种增强嫁接植物病毒抗性的方法

摘要

本发明公开了一种增强嫁接植物病毒抗性的方法，该方法包括：（1）番茄播种，播种前经无菌水浸润5~8小时后于培养箱中催芽；（2）切子叶预培养；（3）将根癌农杆菌侵染预培养过的叶盘外植体，进行共培养；（4）将根癌农杆菌侵染后的子叶转入培养基C中分化出芽；（5）促分化培养；（6）生根培养；（7）田间培养。本发明方法可缩短出芽1周左右，且出芽整齐，分化效率高，可有效防止假阳性，能有效促进正常芽的分化与生长。

主权项

一种制备转基因番茄砧木的方法，包括如下步骤：（1）番茄播种，番茄的种子播种前经无菌水浸润5~8小时后于培养箱中催芽；（2）切子叶预培养，在真叶未出现前，子叶刚冒出种皮且未完全展开时，将子叶两端切除1‑2mm，再从中间横切一刀，每个子叶切成两块，进行预培养；（3）将根癌农杆菌侵染预培养过的叶盘外植体，进行共培养；其中根癌农杆菌含有对卡那霉素抗性基因标记的载体；（4）将根癌农杆菌侵染后的子叶转入培养基C中，叶背朝上光照培养，待愈伤上芽点出现，将带芽点外植体转入C1培养10~14d，分化出芽；其中，培养基C中：pH 6.0，Medium Base +2mg/L反式玉米素核苷+ 200mg/L特美汀 +100mg/L卡那霉素；培养基C1中：pH 6.0，Medium Base +1 mg/L反式玉米素核苷 +80 mg/L卡那霉素 +200 mg/L特美汀；（5）促分化培养，待再生芽长出后切去白化外植体部分将抗性芽转入培养基C3中：pH 6.0，Medium Base +0.5 mg/L反式玉米素核苷 +1.5 mg/L 3‑吲哚乙酸+80 mg/L卡那霉素+ 200 mg/L特美汀；（6）生根培养，待抗性芽茎部长至1cm后，剔除愈伤组织，切下置入培养基D中生根培养15~30d，培养基D为：pH 6.0，Medium Base +2mg/L吲哚丁酸+ 200mg/L特美汀；（7）田间培养：移栽至大田。