[发明专利]一种石斛多糖含量的测定方法及其应用

摘要

本发明公开了一种测定石斛多糖含量的方法及其应用。本发明采用热水浸提法提取石斛粗多糖、采用Sevag法和透析法脱蛋白获得石斛精多糖，通过测定一种石斛的换算因子，依据此换算因子测定其他不同来源的石斛多糖的含量，不需要重新制备粗多糖和精多糖，能有效地降低材料的使用成本，并能够批量的测定多种石斛的多糖含量，使石斛多糖的检测更为方便、简捷、科学。本发明得到的石斛精多糖纯度高、杂质少；与现有超声波提取、酸碱提取等方法相比，本发明的测定方法能够精确地检测石斛多糖的含量，给石斛品种的鉴定提供参考，也给石斛育种、生产和市场消费提供有效的指引。

主权项

一种石斛多糖含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：标准曲线的制备：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2.0ml的0.05mg·mL‑1的葡萄糖标准液，各加蒸馏水补至2.0ml，然后各加6wt%重蒸苯酚1.0ml，摇匀后加入98wt%浓硫酸5.0ml，摇匀，静置5min后置沸水浴中加热20min，冷却至室温，于490nm处测定吸光度；以吸光度为纵坐标、葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；换算因子的测定：取50μg·ml‑1石斛精多糖溶液0.05～1ml，加蒸馏水补足至2.0ml，各加6wt%重蒸苯酚溶液1.0ml，摇匀后加入98wt%浓硫酸5.0ml，摇匀，静置5min后置沸水浴中加热20min，冷却至室温，于490nm处测定吸光度，根据回归方程计算石斛精多糖溶液的浓度；计算换算因子f：f＝Cs/C，其中，Cs为石斛精多糖溶液的实际浓度，C为回归方程计算石斛精多糖溶液的浓度；石斛样品溶液中石斛多糖含量的测定：吸取石斛样品溶液0.05～1ml，各加蒸馏水补至2.0ml，然后各加6wt%重蒸苯酚1.0ml，摇匀后加入98wt%浓硫酸5.0ml，摇匀，静置5min后置沸水浴中加热20min，冷却至室温，于490nm处测定吸光度，由回归方程计算石斛样品溶液中石斛多糖的浓度，由下述公式计算石斛样品溶液中石斛多糖含量X：X=f×C’×D×100%/W；式中：f‑‑换算因子，C’‑‑由回归方程得到的石斛样品溶液中的葡萄糖含量，D‑‑石斛干燥粉末测定中的稀释倍数，W‑‑石斛干燥粉末的质量。