[发明专利]一种肺炎链球菌荚膜多糖的制备方法

摘要

本发明涉及一种肺炎链球菌荚膜多糖的制备方法，该方法包括以下步骤一、肺炎链球菌的培养二、灭活三、肺炎链球菌荚膜粗多糖的提取四、肺炎链球菌荚膜粗多糖的精制。

主权项

一种肺炎链球菌荚膜多糖的制备方法，该方法包括以下步骤，肺炎链球菌的培养，灭活，肺炎链球菌荚膜粗多糖的提取，肺炎链球菌荚膜粗多糖的精制，其特征在于，所述肺炎链球菌的培养，方法如下：搅拌式发酵罐接种后，pH控制在6.5‑8.0，转速50‑200r/min，培养开始阶段采用从发酵罐底部通压缩气体，溶氧量控制在1‑10％，当发酵液菌浓达到0.5‑1时，改变通气方式为从发酵罐的顶部通压缩气体，溶氧控制在0.01‑2％，当发酵液菌浓达到2‑2.5时，适量补充碳源，继续培养至菌体生长的平台期后灭活菌体；所述肺炎链球菌荚膜粗多糖的提取，方法如下：a、取灭活后的肺炎链球菌培养液，去除菌体、菌体碎片及培养液中的小分子成分，得浓缩液；b、浓缩液缓慢加入乙醇至终浓度为15‑35％后，2‑8℃静置过夜；c、所得静置液离心去除沉淀，上清继续加乙醇至终浓度为60‑90％后，2‑8℃静置过夜；d、所得静置液离心收集沉淀，沉淀用水或NaCl溶液复溶后，离心去除沉淀，所得上清即为粗糖溶液；所述肺炎链球菌荚膜粗多糖的精制，方法如下：所得粗糖溶液，采用分子筛排阻层析分离，按照各个型别的肺炎多糖在欧洲药典5.0版中的标准收集大分子多糖；分离后的多糖采用30kDa超滤膜包脱盐，再经冷冻干燥后即得肺炎链球菌荚膜多糖。