[发明专利]一种肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗的制备方法，所述方法，包括如下步骤：将提取得到的肺炎链球菌荚膜多糖进行降解；降解后的肺炎链球菌荚膜多糖和载体蛋白结合，随后制成疫苗制剂。

主权项

一种肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗的制备方法，包括将提取得到的肺炎链球菌荚膜多糖进行降解；降解后的肺炎链球菌荚膜多糖和载体蛋白结合，随后制成疫苗制剂的步骤，其特征在于，其中降解后的肺炎链球菌荚膜多糖和载体蛋白结合，随后制成疫苗制剂，包括以下步骤：1）取降解后的肺炎链球菌荚膜多糖，溶解于溶液中，形成浓度为2‑10mg/ml的多糖溶液；2）向多糖溶液中缓慢加入浓度为100mg/ml的CDAP乙腈溶液，使得溶液中CDAP与荚膜多糖的质量比为0.5‑1.5：1，维持1min‑3min；3）加入0.3M NaOH调节pH至9‑10，维持1‑5min，加入浓度为2‑10mg/ml的CRM197溶液，使得溶液中CRM197与多糖的质量比为1‑1.5：1，维持pH9.5，室温反应1‑2h，加入2M甘氨酸终止反应，2‑8℃缓慢搅拌6‑18h；4）利用Sepharose  4FF层析介质对结合物分别进行纯化：用0.2M氯化钠溶液洗脱，收集外水附近同时具有206nm和280nm吸收的洗脱液，即为单价结合物原液；0.22um无菌过滤后，2‑8℃存放；5）将肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合物和药物可接受的辅料混合，按照常规技术制备成疫苗制剂。