[发明专利]火鸡组织滴虫LAMP检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测火鸡组织滴虫的试剂盒。本发明含有10×等温反应缓冲液、BstDNA聚合酶8000U/mL、l0mMdNTP、25mMMgCl2、200µM内引物、200µM内引物2、l00µM外引物1、100µM外引物2、5M甜菜碱和去离子水的反应液A、反应液B（1000X的荧光染料SYBRGreenⅠ）。通过对鸡肝脏组织样品中DNA提取、火鸡组织滴虫的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出火鸡组织滴虫。解决了现有技术时间长、工作量大、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。

主权项

一种鸡组织滴虫病LAMP检测试剂盒，包括以下成分:（1）反应液A以每管24µL计，为2.5µL 10×等温反应缓冲液、1.0µL 8U/µL Bst DNA聚合酶、2.5µL 10mM dNTP、2µl 25mM MgCl2、1µL四种引物混合液、3.0µL 5M甜菜碱、12µL去离子水； 其中，10×等温反应缓冲液含有200mM pH 8.8三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐，100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1% pH8.8曲拉通X‑100；四种引物混合液含有17.5µL 200µM内引物1、17.5µL 200µM内引物2、70µL l00µM外引物1、70µL l00µM外引物2、175µL去离子水；    内引物1为: GAGCCCATGAACTATTGATTTCTCTAGTTCCTACCTTAAACTATGCC    内引物2为: CTACGACCGCAAGGCTGAAATTAAGCCACAAGCTCCAC外引物1为: GTATCCAACCGGATCAGAG    外引物2为: AAGTTTCCCCGTGTTGAT（2）反应液B：1000×的荧光染料SYBR Green I。