[发明专利]一种微生物发酵制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯的方法

摘要

本发明属于生物制剂制备技术领域，特别涉及一种微生物发酵制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯的方法。采用的菌株是Catenulispora acidiphila，保藏号DSM 44928。其工艺如下(1)培养基中的营养采用碳源和氮源，其中碳源可为葡糖糖、淀粉、糊精、饴糖，氮源可为蛋白胨、花生粉、黄豆粉、牛肉膏、鱼粉，此外还需添加无机盐；(2)使用该生产菌株，可通过摇瓶二级发酵的方法，获得其次生代谢产物‑二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯，具体过程包括原始菌种的活化、摇瓶种子的制备、摇瓶发酵、发酵液和菌丝体的后处理、提取纯化制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯。本发明首次利用微生物发酵获得二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯，并通过核磁共振及X‑ray单晶衍射证明其结构，为代替传统有机合成和植物提取提供了新方法。

主权项

一种利用微生物发酵制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯的方法，其特征在于：所使用的生产菌为Catenulispora acidiphila，菌株保藏号是DSM 44928，其工艺如下：(1)培养基：种子和发酵培养基中的营养采用碳源和氮源，其中碳源可为葡萄糖、淀粉、糊精、饴糖，氮源可为蛋白胨、花生粉、黄豆粉、牛肉膏、鱼粉，此外还需添加无机盐；(2)发酵工艺：使用该生产菌株，可通过摇瓶二级发酵的方法，获得其代谢产物二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯，具体过程包括：原始菌种的活化、摇瓶种子的制备、摇瓶发酵；摇瓶种子的制备：灭菌前培养基为自然pH，接菌环接种生产菌株，转数180‑210rpm，温度为25‑28℃，培养时间4‑5天；摇瓶发酵工艺为：灭菌前培养基为自然pH，按照5‑10％的接种量(以发酵体积为基准)接种，转数180‑210rpm，温度为25‑28℃，培养时间11‑13天；(3)发酵后处理：发酵液和菌丝体经离心、提取、分离得二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯。