[发明专利]一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法

摘要

本发明公开了一种发酵生产葡萄糖氧化酶酶活的方法，属于发酵工程领域。本发明采用本实验室在前期工作中构建的可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastorisGS115-pPIC9K-GOX基因工程菌，保藏编号为CCTCC NO：M 2012266。在甲醇诱导阶段通过添加山梨醇来提高葡萄糖氧化酶的酶活:即控制发酵液中甲醇残留浓度1.8%(W/V)，且甲醇与山梨醇混合添加比例为10:1(W/W)时，葡萄糖氧化酶的酶活为645.3U/mL，比不添加山梨醇(427.6U/mL)提高了50.9%，而且有效缩短了发酵周期，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

主权项

一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法，以一种产葡萄糖氧化酶的基因工程菌为生产菌株，保藏编号为CCTCC NO：M 2012266，于2012年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心；其特征在于将活化后YPD扩培的菌液接入全自动发酵罐中的发酵培养基进行发酵处理，接种量为10%，以25%氨水控制pH 5.5，温度30℃，调节搅拌转速和通气量维持溶氧30%以上；当甘油耗尽DO迅速上升时，开始流加50%甘油补料生长培养基，当菌体干重达到100g/L后，停止补料；待甘油再次耗尽，继续保持基质匮乏状态约1h后，开始流加诱导培养基，诱导条件为：温度降低至20‑25℃，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例为10:1‑5:1（W/W），并且维持整个诱导过程的甲醇浓度为1.5‑2.5%(W/V)，诱导葡萄糖氧化酶表达。