[发明专利]一种骨髓间充质干细胞的体外扩增纯化培养方法及培养基

摘要

本发明提供了一种利于骨髓间充质干细胞向成骨干细胞分化的骨髓间充质干细胞体外扩增纯化培养方法，以及在培养过程中所用的细胞培养基。本发明所用细胞培养基组成如下：bFGF8~12μg/L，EGF8~12μg/L，PDGF-BB8~12μg/L，胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，溶剂为基础培养基；所述基础培养基为DMEM培养液、F12培养液或其混合物。本发明采用早期更换细胞培养液、细胞贴壁传代和培养液中联合添加细胞因子（bFGF、EGF和PDGF-BB）相结合的方法，获得的骨髓间充质干细胞纯度高，体外增殖能力强，并且具有较好的向成骨细胞分化的能力。

主权项

一种骨髓间充质干细胞的体外扩增纯化培养方法，所述方法包括：取骨髓细胞，经筛网过滤后的单细胞悬液接种于培养皿中进行贴壁培养，初始接种密度2~5×106个/mL细胞培养基，培养3~5小时后首次更换细胞培养基，此后每隔8~15小时再次更换细胞培养基，直到接种后60~80小时，然后再每隔3天更换细胞培养基继续培养，直到细胞长至80%~90%融合，以胰酶消化，消化时间不超过2分钟，细胞传代继续培养，获得纯化的骨髓间充质干细胞；所述细胞培养基终浓度组成如下：bFGF 8~12 μg/L，EGF 8~12 μg/L，PDGF‑BB 8~12 μg/L，胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，溶剂为基础培养基；所述基础培养基为DMEM培养液、F12培养液或其混合物。