[发明专利]负载干细胞的大面积羊膜贴片的制备方法

摘要

本发明涉及负载干细胞的大面积羊膜贴片的制备方法。具体而言，本发明利用足月剖腹产产妇废弃的羊膜制备了负载间充质干细胞的大面积的羊膜贴片。本发明为面积较大的烧伤和褥疮患者的治疗提供了有效的支持，具有广阔的应用前景。

主权项

一种负载干细胞的大面积羊膜贴片的制备方法，其包括如下步骤：1）将取自足月剖宫产产妇的废弃羊膜用PBS洗净，然后用0.5‑5.0g/L的胰蛋白酶消化去除羊膜表面的上皮细胞，2）选取厚度为1‑4mm的玻璃板，切割打磨成能放入直径15‑25cm的培养皿中的大小，3）将稍大于上述玻璃板的羊膜铺在玻璃板上，多余部分内折，使表面尽量平整，用细胞刮刀反复刮几次去除残留细胞，将膜片连同玻璃板一同放入培养皿内，浸泡在α‑MEM培养基或者DMEM培养基中，上皮面向上，4℃保存备用，4）将培养好的干细胞以0.5‑2×104/cm2密度接种于上述处理好的羊膜上，培养至细胞贴壁，再加入10‑50mL含10‑20%血清的α‑MEM培养基或DMEM培养基，细胞长满后待移植应用。