[发明专利]一种鸭疫里默氏杆菌二价复合佐剂灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种鸭疫里默氏杆菌二价复合佐剂灭活疫苗的制备方法，该方法对鸭疫里默氏杆菌的菌株进行了严格筛选，通过对制备制苗用菌液、灭火过程的严格控制，制备新型的复合佐剂与制苗的灭活菌液合理混配、乳化制得疫苗。用该方法制备的疫苗，单次免疫对鸭疫里默氏杆菌病预防效率高，效果明显，从而减少了反复使用次数，降低了使用成本低。另外该工艺方法设计科学、系统，设备简单，易于操作，得到的产品效果稳定，具有较好的社会效益和经济效益。

主权项

一种鸭疫里默氏杆菌二价复合佐剂灭活疫苗的制备方法，其特征在于其制备方法及步骤如下：（1）制备种子液：将沃华研发中心保种的鸭疫里默氏杆菌2型GD‑2株和沃华研发中心保种的鸭疫里默氏杆菌10型GN19株分别接种于改良酵母琼脂血平板进行培养，在37℃下培养24小时，挑取单菌落于改良酵母琼脂血平板纯化一代，选5～10个典型菌落接种于改良酵母液体培养基，在37℃下振荡培养24小时，得到种子液，用显微镜进行纯粹检验，将检验合格的作为种子，放入冰箱于2～8℃下保存备用；（2）制备制苗用菌液：在改良酵母液体培养基中接入步骤（1）得到的保存不超过7天的种子液，接入量为液体培养基量的2%～5%，37℃下培养8～12小时，对菌液进行检验提纯，选取活菌数不低于2×1010CFU/ml的菌液；（3）灭活：将步骤（2）得到的制苗菌液中加入菌液量0.3%的甲醛溶液，在37℃下灭活24～48小时，然后进行活菌检验，至无活菌生长；（4）制备复合佐剂：取占最终疫苗质量15%的氢氧化铝胶，用生理盐水溶解，将杨树皮类脂和免疫增强剂按比例加入，其中杨树皮类脂佐剂加入量为最终疫苗质量的4‑6%，免疫增强剂用量为最终疫苗质量的1‑3%，用均质机混合均匀，即得免疫复合佐剂；（5）制备疫苗：将步骤（3）得到的制苗的灭活菌液与免疫复合佐剂混合，以3000rpm转速搅拌30分钟，运行完毕，疫苗降温至室温，分装，得到疫苗成品。