[发明专利]靶向复合纳米粒子的制备方法

摘要

靶向复合纳米粒子的制备方法，它涉及一种靶向诊疗一体化复合纳米粒子的制备方法。本发明解决了目前抗肿瘤药物载体稳定性差、载药量小的技术问题。本方法如下：制备Fe3O4-HCPT@SiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液；将Fe3O4-HCPT@SiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、N，N-二甲基甲酰胺和靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应，然后离心，即得；本方明将聚苯乙烯磺酸(PSS)与10-羟基喜树碱自组装方式吸附在Fe3O4磁性纳米粒子上，本方法可行性高；具有本身磁性纳米粒子的物理靶向作用及进一步表面功能化修饰生物分子的主动靶向作用，在双重靶向作用下能增加药物浓度。

主权项

靶向复合纳米粒子的制备方法，其特征在于靶向复合纳米粒子的制备方法按照以下步骤进行：一、制备磁性纳米粒子：将10ml浓度为1mol/L的FeCl3水溶液、2.5ml FeSO4·7H2O的HCl溶液加入到125ml浓度为0.7mol/L的NH3·7H2O，继续搅拌30min，离心分离并收集上清液中的产物，将上清液中的产物用去离子水洗涤3次，然后再分散在150ml去离子水中，得到Fe3O4纳米粒子溶液；所述的FeSO4·7H2O的HCl溶液中FeSO4·7H2O的浓度为2mol/L、HCl的浓度为2mol/L；二、制备Fe3O4‑HCPT纳米粒子：将10ml Fe3O4纳米粒子溶液分散到10ml聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超声反应30min，磁力分离，然后用浓度为0.51mol/L的NaCl溶液洗涤，最后分散在水中，得到浓度为7.5mg/ml的PAH‑包裹的Fe3O4纳米粒子溶液；步骤二中所述的聚氢氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氢氯丙烯胺浓度为1mg/ml，NaCl的浓度为0.5mol/L；三、将10ml PAH‑包裹的Fe3O4纳米粒子溶液分散到10ml聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中超声反应30min，得到Fe3O4磁性纳米粒子前体；步骤三中所述的聚苯乙烯磺酸酸钠的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸钠的浓度为1mg/ml，NaCl的浓度为0.5mol/L；四、将364mg10‑羟基喜树碱溶解在150ml NaOH溶液中，调节pH值为11，在加入浓度为1mol/L的HCl调节pH值为4.8，得到HCPT微乳液，将10mlFe3O4磁性纳米粒子前体加入到10ml HCPT微乳液中，搅拌并通过紫外吸收监测反应，当10‑羟基喜树碱的特征吸收峰消失时，停止反应，磁力分离收集沉淀，并用pH值为4.8的HCl溶液洗涤，然后加入150mL去离子水中，得到聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液；五、制备Fe3O4‑HCPT@SiO2：将1ml正硅酸乙酯与30ml乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，将2.5mLNH3·H2O、38mL H2O、38mL乙醇及10mL聚苯乙烯磺酸钠/HCPT的Fe3O4磁性纳米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反应4小时，磁力分离，收集沉淀，并用水与乙醇的混合溶液洗涤3次，再分散在100ml去离子水中，得到Fe3O4‑HCPT@SiO2水溶液；六、然后在转速为10000rpm的条件下离心Fe3O4‑HCPT@SiO2水溶液30min，去掉上 清液，加入乙醇洗涤，超声分散15‑20min；七、重复步骤六3‑4次，得到浓度为7.5mg/mLFe3O4‑HCPT@SiO2乙醇溶液；八、将10ml Fe3O4‑HCPT@SiO2乙醇溶液与0.03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80℃的条件下搅拌3小时，然后按照在转速为10000rpm的条件下离心30min，向沉淀中加入乙醇，超声分散15‑20min的顺序，重复5次，得到表面氨基化修饰的Fe3O4‑HCPT@SiO2溶液；九、制备金纳米粒子：向40ml蒸馏水中加入0.01ml浓度为0.25mol/L氯金酸水溶液、0.2ml浓度为0.2mol/L碳酸钾水溶液、0.6ml浓度为0.5mol/L硼氢化钠水溶液，在600rpm的条件下搅拌10min，再加入浓度为0.5mol/L的硼氢化钠水溶液，直到溶液的蓝紫色变为橙红色停止加入硼氢化钠水溶液，再搅拌5min，得到金纳米粒子溶液；十、制备草莓状金纳米复合粒子：将0.07ml表面氨基化修饰的Fe3O4‑HCPT@SiO2溶液稀释至50ml，然后再滴入到金纳米粒子溶液中，然后以600rpm的速度离心90min，得到Au/SiO2溶液；十一、制备金纳米壳：将25mg碳酸钾溶解在100ml蒸馏水中，以600rpm的速度搅拌10min，然后加入1.5ml浓度为0.25mol/L的氯金酸水溶液，继续搅拌30分钟，得混合液，将4ml混合液与Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm离心30min，然后再将离心后的沉淀分散于10ml水中并超声10min，得到包裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液；十二、将0.03g 1，2‑二巯基‑3‑环己烷基聚乙二醇和3～4ml四氢呋喃加入到离心管中，再加入1～5ml裹金纳米壳的SiO2纳米离子水溶液和50mg卟啉类光敏剂分子，反应72小时，反应结束后在转速为6000rpm的条件下离心10分钟，收集沉淀，并将沉淀分散在甲醇中，得到浓度为7.5mg/mL的Fe3O4‑HCPT@SiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液；十三、将50mg～100mg Fe3O4‑HCPT@SiO2偶联卟啉类光敏剂的一体化纳米粒子的甲醇溶液、10ml N，N‑二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗肿瘤药物在室温搅拌反应2小时，然后在转速为14000rpm、温度为4℃的条件下离心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向复合纳米粒子的甲醇溶液；步骤十二中所述的卟啉类光敏剂分子为5‑(4‑氯乙酰氧基苯基)‑10，15，20‑三(4‑羧基苯基)卟啉或四氯乙酰氧基苯基卟啉；步骤十三中所述的靶向性生物分子为叶酸；步骤十三中所述的抗肿瘤药物为单克隆抗体赫赛汀、紫杉醇、阿霉素、5‑氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。