[发明专利]一种兽用抗生素阿维拉霉素分离纯化的方法

摘要

本发明涉及分离纯化技术，旨在提供一种兽用抗生素阿维拉霉素分离纯化的方法。该方法是以有机溶剂浸提含阿维拉霉素的菌丝体，然后通过结晶、硅胶柱层析、ODS柱洗脱分离、重结晶，抽滤后结晶用纯水漂洗，烘干后获得阿维拉霉素A和B纯品。本发明最终得到的纯品分别是阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的纯品，而不是阿维拉霉素各组分混合的纯品；纯化步骤简便，易操作；平均得率在37.50%以上、纯度在98%以上，在阿维拉霉素测定中可作为对照品。

主权项

一种兽用抗生素阿维拉霉素分离纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）阿维拉霉素菌丝体经过浸提、结晶得到阿维拉霉素粗提物将含有阿维拉霉素的菌丝体加入有机试剂中，在温度不超过40℃的条件下超声90~120 min，3000 r/min离心10 min得上清液即为浸提液；按浸提液∶水的体积比为1∶1~ 1∶2进行补水结晶，4000 r/min离心15 min，40℃下烘干得阿维拉霉素粗提物；所述有机试剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙脂、乙腈或氯仿中的一种或几种的组合，阿维拉霉素菌丝质量与有机试剂体积之比为1∶30~ 1∶50；（2）阿维拉霉素粗提物经过硅胶柱层析得到阿维拉霉素A和B的混合物以3%的2‑丙醇氯仿溶解阿维拉霉素粗提物，上硅胶柱；在1 mL/min的流速下，以3% 的2‑丙醇氯仿洗脱；阿维拉霉素粗提物∶硅胶的质量比为1∶50~1∶70；采用硅胶厚度为0.2 mm的硅胶HF254板进行薄层层析色谱追踪斑点，根据斑点位置进行分段收集；目标部分的洗脱液在40℃下旋转蒸发并烘干得到阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的混合物；（3）阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的混合物过十八烷基键合相硅胶柱分离得到阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的纯品取80~120 mg阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的混合物，以乙腈溶解后上ODS柱，ODS质量为100 g；采用乙酸铵水溶液‑乙腈溶剂体系为洗脱液在1 mL/min的流速下以进行洗脱，洗脱液中乙酸铵水溶液与乙腈的体积比为55∶45；采用硅胶厚度为0.2 mm的硅胶HF254板进行薄层层析色谱追踪斑点，根据斑点位置进行分段收集；目标部分阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的洗脱液分别按洗脱液∶水的体积比为1∶1~1∶2进行加水重结晶，抽滤后结晶用纯水漂洗，40℃下烘干后即获得阿维拉霉素A和阿维拉霉素B纯品。