[发明专利]一种极耐热糖苷酶基因及其可溶性表达与应用方法有效
| 申请号： | 201210549479.5 | 申请日： | 2012-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN103146723A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 赵林果;裴建军;曹福亮;王飞;汪贵斌 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/70;C12N15/66;C12N9/24;C12P33/00;C12R1/01;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210037 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种极耐热糖苷酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达与应用，该极耐热糖苷酶基因的DNA序列SEQ NO：1通过密码子的替换和诱导条件的改变，实现了该酶在大肠杆菌中可溶性表达，酶活达到13U/mL，该糖苷酶具有极强的耐热性能和特异性降解人参皂苷Rb1为Rd的能力，该酶在90℃、pH4.8的条件下酶活最高，在温度70-100℃、pH4.8-8.0的范围内，均保持较高的酶活，该酶对葡萄糖的耐糖系数Ki为1.5mol/L，该酶1U/mL在90℃、pH5.2、5％甲醇条件下30min可将99％人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd，该极耐热糖苷酶性质优异，可应用于苷元类物质的酶法转化。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 耐热 糖苷酶 基因 及其 可溶性 表达 应用 方法 | ||
【主权项】：
一种极耐热糖苷酶基因，其特征在于，该极耐热糖苷酶基因的获取过程为：参照NCBI上已发表的T.thermarum DSM 5069极耐热糖苷酶的基因序列设计引物，登录号：YP_004660190.1，以提取的T.thermarum DSM 5069基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得极耐热糖苷酶基因全序列；该极耐热糖苷酶基因克隆到pET‑28a载体，可得到包含极耐热糖苷酶基因核苷酸序列的重组质粒pET‑28a‑bgl。
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