[发明专利]酿酒酵母表达载体及其构建和应用有效
| 申请号： | 201210552870.0 | 申请日： | 2012-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN103865951B | 公开（公告）日： | 2018-06-26 |
| 发明（设计）人： | 姚泉洪;田永生;彭日荷;许晶;王波;王丽娟;韩静 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/66;C12P7/16;C12R1/865 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种酿酒酵母表达载体及其构建和应用。所述酿酒酵母表达载体是通过在pYF1274质粒的BamHI和SacI酶切位点之间插入含有生物法合成丁醇用的6关键酶基因的融合基因编码序列构建而成的。通过将该酿酒酵母表达载体转化的酿酒酵母生物法生产丁醇，产量达到1.556g/L，这为通过基因工程手段生产生物丁醇提供了有益的帮助。 | ||
| 搜索关键词： | 酿酒酵母表达载体 丁醇 构建 编码序列构建 基因工程手段 关键酶基因 生物法合成 生物法生产 酿酒酵母 融合基因 生物丁醇 位点 质粒 应用 转化 帮助 生产 | ||
【主权项】：
1.一种酿酒酵母表达载体，其特征在于，是在pYF1274质粒的BamHI和SacI酶切位点之间插入含有生物法合成丁醇用的6关键酶基因的融合基因编码序列构建而成的，所述pYF1274质粒是在酵母商业化载体pPC‑86制备方法的基础上把原有的ADC1基因启动子替换为PGK强启动子构建而成；所述的6关键酶融合基因是由口蹄疫病毒2A蛋白与所述6关键酶基因的核苷酸序列串联而成的；所述的6关键酶融合基因包括：⑴EcatoB，即乙酰辅酶A乙酰转移酶，其核苷酸序列如SEQ.ID No.1所示；⑵Cahbd，即3‑羟基丁酰‑CoA脱氢酶，其核苷酸序列入SEQ.ID No.2所示；⑶Cacrt，5‑巴豆酸酶，其核苷酸序列如SEQ.ID No.3所示；⑷Tdter，即反式烯脂酰‑CoA还原酶，其核苷酸序列如SEQ.ID No.4所示；⑸CaadhE2，即乙醇脱氢酶E，其核苷酸序列如SEQ.ID No.5所示；⑹Cbfdh，即甲酸脱氢酶，其核苷酸序列如SEQ.ID No.6所示；所述的串联方式为EcatoB‑2A蛋白‑Cahbd‑2A蛋白‑Cacrt‑2A蛋白‑Tdter‑2A蛋白‑CaadhE2‑2A蛋白‑Cbfdh。
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