[发明专利]一种利用糖链标签以共价键定向固定单链抗体的方法

摘要

本发明公开一种利用糖链标签以共价键定向固定单链抗体的方法。该方法可将单链抗体广泛应用于免疫检测及免疫传感器制备，属于生物技术领域。该方法包括以下步骤：（1）在大肠杆菌中定点糖基化单链抗体。通过单链抗体基因在大肠杆菌中与来源于空肠杆菌的pgl基因族共表达，定点糖基化单链抗体；（2）用高碘酸钠氧化糖基化的单链抗体上的糖链产生醛基，单链抗体通过醛基将单链抗体以共价键方式定向固定在含有氨基功能基团的固体材料表面，提高被固定单链抗体的稳定性及活性。该方法提供以共价键定向固定单链抗体新途径。为单链抗体广泛应用于免疫检测领域提供新技术。

主权项

一种利用糖链标签以共价键定向固定单链抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、在单链抗体基因的5′端，或者3′端，或者是在柔链区引入编码寡糖转移酶识别序列：D/E‑X‑N‑X‑S/T；将重组后的单链抗体基因连接到原核质周腔表达载体；其中，D代表天冬氨酸，E代表谷氨酸，N代表天冬酰胺，S代表丝氨酸，T代表苏氨酸，X代表天然20中氨基酸中的任意一种氨基酸；S2、将所述表达载体转化到含有来源于空肠杆菌由氯霉素抗性标记的pgl基因族工程菌株CLM37，然后，将阳性转化子进行自诱导表达；S3、收集菌体，提取质周腔可溶蛋白，分离纯化糖基化单链抗体；S4、用高碘酸钠氧化糖基化单链抗体后，用醋酸钠缓冲液透析去掉高碘酸钠后，将单链抗体通过氧化糖链产生的醛基固定在带有酰肼基团或氨基基团的固体材料表面，实现以共价键定向固定单链抗体在固体材料表面。