[发明专利]一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法

摘要

本发明公开了一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法。包括甘氨酸与量子点偶联制备探针、甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞、活细胞成像和示踪等步骤。量子点难透过细胞膜，用于活细胞成像探针必须与其他分子偶联以便进入细胞，现比较常用的偶联分子是穿膜肽。用水溶性量子点与甘氨酸偶联，可以增加量子点的透膜能力，使其进入细胞发挥标记和示踪活细胞的作用。甘氨酸修饰的量子点均匀分布在胞浆中，发光分散均匀，而未修饰的量子点主要附着于细胞膜上，颗粒相对粗大，且不均匀。与穿膜肽修饰的量子点比较，甘氨酸修饰的量子点探针具有成本低、制作快速、性质稳定、使用方便、胞内分布均匀等特点。

主权项

一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法，包括如下步骤：1）甘氨酸与量子点偶联制备探针将羧基水溶性量子点和甘氨酸分散在50mM硼酸盐缓冲液中，加入N‑（3‑二甲基氨基丙基）‑N‑乙基碳二亚胺盐酸盐，使水溶性量子点和甘氨酸进行偶联，得到量子点‑甘氨酸偶合物；截留分子量为50kDa的超滤管纯化浓缩量子点‑甘氨酸偶合物，即得量子点‑甘氨酸探针；2）细胞培养采用胰酶组织消化法制取乳鼠组织细胞悬液，将乳鼠组织细胞悬液接种至细胞培养板或细胞培养瓶，置入细胞培养箱培养2～3d；3）量子点‑甘氨酸探针标记细胞弃去步骤2）中的细胞培养板或细胞培养瓶中的培养基，用磷酸盐缓冲液轻柔漂洗2～3次后，加入含有0.5 μM量子点‑甘氨酸探针或0.5 μM水溶性量子点的磷酸盐缓冲液，37℃孵育30min后去除含有0.5 μM量子点‑甘氨酸探针或0.5 μM水溶性量子点的磷酸盐缓冲液，用磷酸盐缓冲液轻柔漂洗2～3次，更换为普通细胞培养基，完成活细胞标记；4）激光共聚焦显微镜观察根据水溶性量子点的类型选择相应的激发波长，将步骤3）中标记好的活细胞置于激光共聚焦显微镜下观察。