[发明专利]一种壳聚糖修饰提高胆固醇氧化酶稳定性的方法

摘要

一种壳聚糖修饰提高胆固醇氧化酶稳定性的方法，属于酶工程技术领域。本发明通过交联剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)或戊二醛等对胆固醇氧化酶与壳聚糖20000进行连接，修饰后的酶在热、pH和存储稳定性方面均优于游离酶，本发明易操作、成本低、环境污染小、适于大规模应用。

主权项

一种壳聚糖修饰提高胆固醇氧化酶稳定性的方法，其特征在于，A、采用1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺交联或B、采用戊二醛交联，步骤为：A、采用1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺交联：用调整胆固醇氧化酶分子游离羧酸基与壳聚糖氨基摩尔比为1:10，胆固醇氧化酶分子的游离羧基与交联剂1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺EDC 摩尔比为1:2，控制EDC交联pH为6.0，反应温度为4‑10℃，反应16‑20小时；或B、采用戊二醛交联：调整胆固醇氧化酶分子游离氨基与壳聚糖氨基摩尔比为1:2，胆固醇氧化酶游离氨基与交联剂戊二醛摩尔比为1:2，控制戊二醛交联pH为8.0，反应温度为4‑10℃，反应16‑20小时；采用A或B交联后，均使用Sehparose 4B介质进行分子筛层析，去除未修饰的蛋白和壳聚糖。