[发明专利]脑多头蚴热休克蛋白抗原的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201210564524.4 | 申请日： | 2012-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN103205447A | 公开（公告）日： | 2013-07-17 |
| 发明（设计）人： | 杨光友;聂华明;彭雪蓉;古小彬 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脑多头蚴热休克蛋白抗原的制备方法，该方法从羊脑多头蚴原头节提取总RNA，采用RT-PCR技术首次扩增出HSP基因序列，该基因的开放阅读框为408bp，编码136个氨基酸。将此基因克隆到pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a-HSP，经转化大肠杆菌BL21（DE3）后IPTG诱导表达，用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物；以纯化后的表达蛋白作为抗原，建立检测羊脑多头蚴病抗体的重组蛋白胶体金渗滤法(DIGFA）。本发明通过分子生物学的方法，人工合成了一种可以用于脑多头蚴病诊断的重组抗原，并评价了该表达蛋白在脑多头蚴病诊断中的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 多头 休克 蛋白 抗原 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种脑多头蚴热休克蛋白抗原的制备方法，其特征在于，该方法从羊脑多头蚴原头节提取总RNA，采用RT‑PCR技术首次扩增出HSP基因序列，该基因的开放阅读框为408bp，编码136个氨基酸；将此基因克隆到pET‑32a(+)载体，构建重组表达质粒pET‑32a‑HSP，经转化大肠杆菌BL21（DE3）后IPTG诱导表达，用SDS‑PAGE和Western‑blot检测表达产物；以纯化后的表达蛋白作为抗原，建立检测羊脑多头蚴病抗体的重组蛋白胶体金渗滤法。
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