[发明专利]基因转染实时监测的方法

摘要

本发明涉及一种基因转染实时监测的方法，其基于四甲基异硫氰酸罗丹明标记的聚乙烯亚胺，可在室温下对聚乙烯亚胺进行四甲基异硫氰酸罗丹明标记，合成简单、条件温和、成本低、便于操作。通过标记了四甲基异硫氰酸罗丹明的聚乙烯亚胺静电吸附表达荧光蛋白的质粒DNA，并将质粒DNA转染到细胞内，采用荧光成像的方法实时监测作为载体的聚乙烯亚胺和质粒在细胞内的分布及质粒在细胞内的表达，该方法简单易于实现，适用于绝大多数实验室，便于操作推广。

主权项

一种基因转染实时监测的方法，其特征在于，包括如下步骤：将四甲基异硫氰酸罗丹明标记的聚乙烯亚胺与含有荧光蛋白表达基因的待转染质粒DNA按照质量比为1:1~4:1的比例在水中混合均匀，室温下反应，得到负载质粒DNA的聚乙烯亚胺的水溶液；向激光共聚焦成像培养皿中加入含待转染细胞的培养液，控制所述待转染细胞密度在1.2~2*104个/孔之间，在二氧化碳培养箱中于37℃孵育18~24小时，所述培养液的培养基含10%质量分数的胎牛血清且不含双抗；更换使用不含胎牛血清且不含双抗的培养基并加入所述负载质粒DNA的聚乙烯亚胺的水溶液，控制所述聚乙烯亚胺的终浓度为1~10μg/mL，继续孵育4~6小时后换用含10%质量分数的胎牛血清且不含双抗的培养基继续孵育18~48小时；及用pH 7.4的磷酸缓冲液冲洗上述培养的待转染细胞，加入新鲜的含10%质量分数的胎牛血清且不含双抗的培养基进行实时激光共聚焦扫描监测。