[发明专利]封闭系统多阶段核酸扩增反应

摘要

本发明涉及用于进行多阶段扩增反应的系统、方法和设备，特别是在流体封闭条件下。一方面，本发明的方法在流体封闭反应系统中进行，所述系统使得能够分离一部分的第一(或在前)反应混合物，并且将其用作第二(或随后)反应混合物中的样品或标本，由此基本上避免仅简单地将两种反应混合物混合在一起时第一反应组分对第二反应可能造成的干扰影响。在该方面，可以将本发明的系统、方法和设备用于任何扩增反应，该扩增反应允许基于使用嵌套引物的多阶段扩增。

主权项

控制嵌套扩增反应的方法，所述方法包括如下步骤：a)在流体封闭系统的反应室中，进行第一阶段扩增反应，包括使用第一阶段扩增试剂在第一反应混合物中扩增来自样品的一种或多种靶多核苷酸，以形成一种或多种第一扩增子，所述第一阶段扩增试剂包括针对每一种靶多核苷酸的初始引物，其中存在有荧光指示剂的情况下扩增所述一种或多种第一扩增子，所述荧光指示剂能够产生与所述第一阶段扩增反应中的扩增子的数量相关的光信号；b)监测所述第一阶段扩增反应中的荧光指示剂的光信号；c)当所述光信号达到或超过阈水平时，在所述反应室中自动保留有效部分的所述第一阶段扩增反应的反应混合物；以及d)在所述反应室中，使用第二阶段扩增试剂在第二反应混合物中扩增所述有效部分中的一种或多种第一扩增子，以形成一种或多种第二扩增子，所述第二阶段扩增试剂包括针对所述一种或多种第一扩增子中的每一种的至少一种次级引物，使得每一种次级引物相对于所述第一扩增子的初始引物均嵌套在所述第一扩增子中。