[发明专利]艰难梭菌外毒素A羧基端序列密码子优化基因片段、表达载体构建方法及其表达蛋白的应用有效
| 申请号： | 201210568057.2 | 申请日： | 2012-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN103865938A | 公开（公告）日： | 2014-06-18 |
| 发明（设计）人： | 刘红;冯东晓;邢平平;徐从伦;李敏;郭桂平;于锦丽;赵志伟 | 申请（专利权）人： | 山东国际生物科技园发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/70;C12N15/66;C07K16/12;A61K39/08;A61P31/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 264670 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及密码子改造的艰难梭菌外毒素A羧基端基因片段、表达载体构建方法及其在大肠杆菌中的高效表达。该密码子改造后的基因序列既兼顾大肠杆菌密码子使用偏好，又降低了原始基因重复序列对于基因合成和表达的影响。本研究所涉及的高效表达载体由密码子改造后的艰难梭菌外毒素A羧基端基因与原核表达载体pET32b(+)组成，经IPTG诱导后可以高表达出带His标签的融合蛋白。该融合蛋白经凝血酶酶切后可以释放艰难梭菌外毒素A羧基端约872个氨基酸片段。本研究中经密码子改造的艰难梭菌外毒素A羧基端基因片段可以大肠杆菌中高效融合表达，纯化后的蛋白作为抗原可用于制备抗艰难梭菌外毒素A抗体和抗艰难梭菌感染疫苗的制备。 | ||
| 搜索关键词： | 艰难 梭菌外 毒素 羧基 序列 密码子 优化 基因 片段 表达 载体 构建 方法 及其 蛋白 应用 | ||
【主权项】：
一种密码子优化的艰难梭菌外毒素A羧基端基因序列，其是将艰难梭菌外毒素A原始序列重复区中保守氨基酸序列(conservative aa sequence，CAS)的密码子优化为大肠杆菌中使用频率高的兼并性密码子，优化后的基因序列可在大肠杆菌中表达，而氨基酸序列不变。
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