[发明专利]一种藻毒素降解菌的原生质体制备与再生

摘要

本发明涉及水处理微生物技术领域，具体涉及一种藻毒素降解菌的原生质体制备与再生。该菌分离自蓝藻脱水压滤液，经鉴定为锤形赖氨酸芽孢杆菌，现保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.6107，保藏名称为MC-LR降解菌R3。本发明主要包括该菌种子培养液的制备、菌丝悬液的制备、细胞壁的酶解、原生质体悬液的制备和原生质体的再生。本发明所采用的原生质体制备与再生，对降解MC-LR的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌R3的原生质体制备率最高可达85.10%，再生率可达38.40%，且制备与再生过程中设备要求低，操作简单，酶解时间与再生周期短，有利于R3后续融合子的制备及工程菌的构建。

主权项

一种藻毒素降解菌的原生质体制备与再生方法，其特征如下：从纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CGMCC NO.6107的斜面培养基中挑取一环菌接入新鲜细菌液体培养基，130r/min、28℃条件下活化培养5‑60 h至不同的生长期，得到R3种子培养液；继而制备菌丝悬液， 32℃、1 h条件下酶解细胞壁，进行原生质体悬液的制备；将上述特征溶菌酶处理前的种子培养液用无菌蒸馏水，酶解后的原生质体悬浮液同时用无菌蒸馏水和浓度为0.55 mol/L的NaCl溶液均稀释至10‑6、10‑7和10‑8三个浓度梯度，分别涂布在细菌固体培养基、细菌固体培养基和高渗固体培养基上，置于32℃恒温培养箱中培养24‑48 h，得到原生质体再生菌落。