[发明专利]一种制备猪细小病毒病灭活疫苗的方法

摘要

一种制备猪细小病毒病灭活疫苗的方法，属于生物技术领域。所述方法包括以下步骤：a.制苗用细胞的培养；b.病毒接种与培养；c.病毒液收获；d.病毒液灭活；e.疫苗制备。本发明对制苗用种毒及细胞进行了筛选，加强了病毒与细胞的匹配性；采用激流灌注式生物反应器培养体系提高了病毒的增殖滴度及收获量；对于乳化工艺的改进提升了免疫效果；而且整个生产工艺不涉及其他生物安全和公共卫生问题，适合于大规模生产。

主权项

一种制备猪细小病毒病灭活疫苗的方法，其特征在于，它利用激流灌注式生物反应器为培养系统，所述激流灌注式生物反应器包括第一蠕动泵（1）、第二蠕动泵（2），第一硅胶管（3）、第二硅胶管（4）、激流罐（5）、灌注袋（6）、有孔硅胶管（7）和聚酯纤维纸片载体（8）；所述灌注袋（6）为内含聚酯纤维纸片载体的细胞培养袋，两个灌注袋结构与功能完全相同，以相同的方式与激流罐（5）连接，通过外源泵实现物质交换；灭活疫苗的制备按以下步骤进行：a.制苗用细胞的培养将细胞悬液即种子细胞和细胞生长液的混合液接种至激流灌注式生物反应器的灌注袋（6），使细胞贴附在聚酯纤维纸片载体（8）上，接种密度为每克载体接种0.8～1.2×107个细胞，设定设备参数：温度T1：37.5～38℃、T2：43～46℃、T3：35.5～37℃，pH：7.2～7.8，DO：30%～70%、振荡速度40～55r/min，空气流量100ml/min～1000ml/min，启动细胞培养程序，进行细胞培养，得到制苗用细胞；b.病毒接种与培养当细胞单日耗糖趋于平稳时，表明细胞达到接毒要求，排空反应器内液体，将猪细小病毒种毒接种制苗用细胞，设定设备参数：温度T1：35～38℃、T2：37～40℃、T3：34～36℃，pH：7.3～7.8，DO：30%～70%，振荡速度35~50r/min，空气流量400 ml/min～4000ml/min，启动病毒培养程序，扩增培养猪细小病毒；c.病毒液收获病毒培养40～42h后，收获激流罐（5）与灌注袋（6）内的病毒液，将灌注袋（6）反复冻融2～3次后收获上清液，混合后‑20℃保存备用；检测病毒液效价和血凝价；d.病毒液灭活收获的病毒液中加入灭活剂，灭活病毒；e.疫苗制备灭活的病毒液加入佐剂，乳化制备成猪细小病毒病灭活疫苗。