[发明专利]一种人抗凝血酶-Ⅲ浓缩物中肝素含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种人抗凝血酶-Ⅲ浓缩物中肝素含量的测定方法，其特征是包括待测样品的处理、标准曲线的制作与样品的测定三个部分。待测样品的处理方法为稀释与加热处理，标准曲线的制作与样品的测定采用微量发色底物法。发明有益效果是：利用微量发色底物法进行测定，具有灵敏度高，操作简单、省时，检测所需试剂用量小等优点；通过60~80℃加热处理待检样品抗凝血酶-Ⅲ浓缩物20~50min，能够灭活待检样品中对结果造成很大影响的抗凝血酶-Ⅲ成分，但不会对肝素的活性产生影响，提高了测定结果的准确性；采用绘制标准曲线计算结果，稳定性、准确性高。

主权项

1.一种人抗凝血酶-Ⅲ浓缩物中肝素含量的测定方法，其特征是包括待测样品的处理、标准曲线的制作与样品的测定三个部分;其操作步骤为： 、待测样品的处理：用0.02mol/L Tris缓冲液（pH8.4）将已知效价的抗凝血酶-Ⅲ浓缩物样品稀释至抗凝血酶-Ⅲ浓度为1IU/ml，60~80℃高温水浴处理20~50min;、标准曲线的制作与样品的测定：a用Tris缓冲液pH8.4将已知效价的肝素标准品稀释至0~0.1IU/ml的已知浓度，作为标准溶液；b取四种或四种以上不同浓度肝素标准溶液及处理后的待测样品溶液一定体积于微孔板不同孔中；c每孔加入等体积0.5~2.0IU/ml 抗凝血酶-Ⅲ标准溶液，混合均匀，37℃孵育2分钟；d每孔加入等体积活化的牛凝血因子Ⅹ溶液即牛FXa溶液，混合均匀，37℃孵育2分钟；e每孔加入等体积发色底物N-α-苄氧羰基- D-精氨酰- L-甘氨酰-L-精氨酸-P-硝基苯胺的盐酸盐溶液即S-2765溶液，混合均匀，37℃孵育2分钟；f每孔加入适量乙酸，混合均匀终止反应；g将微孔板直接在酶标仪上于波长405 nm处读取吸光值；h根据肝素标准溶液浓度与测得的相应吸光值绘制标准曲线；i以待测溶液反应产物吸光值根据标准曲线计算每国际单位人抗凝血酶-Ⅲ溶液中肝素的含量。