[发明专利]免疫球蛋白结构域的工程改造

摘要

本发明提供在框架区（FR）包含一个或多个非常规二硫键的单域抗体（sdAb）骨架。所述一个或多个非常规二硫键可以在通过突变引入至FR2和FR3中的半胱氨酸之间形成。在所述sdAb骨架是VH的情况下，所述Cys可以在基于Kabat编号的位置（47‑49）中的任一位置处以及位置（67‑71）中的任一位置处引入；在一个实例中，Cys可在基于Kabat编号的位置（49）和（69）处引入。在所述sdAb骨架是VL的情况下，所述Cys残基可以在基于Kabat编号的位置46‑49中的任一位置处和位置（62‑66）中的任一位置处引入；在一个实例中，所述Cys残基可以在基于Kabat编号的（位置48和64处）引入。

主权项

一种在框架区(FR)包含一个或多个非常规二硫键的免疫球蛋白骨架，其中所述免疫球蛋白骨架包括选自以下的氨基酸序列：QVQLVESGGGLIKPGGSLRLSCAASGDTVSDESMTWVRQAPGKGLEWVAISSSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCVTDNRSCQTSLCTSTTRSWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：2)；QVQLVESGGGLIKPGGSLRLSCAASGVTLSPECMAWVRQAPGKGLEWVAISSSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCVSCEGENAFWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：4)；QVQLVESGGGLIKPGGSLRLSCAASGYTVSSECMGWVRQAPGKGLEWVAISSSSGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCVRDSKNCHDKDCTRPYCSWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：6)；QVQLVESGGGLIKPGGSLRLSCAASGFSVISESMTWVRQAPGKGLEWVAISSSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTVHLQMNSLRAEDTAVYYCAAKKIDGARYDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：8)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYLNWYQQKPGKAPKLLFAASTLQSGVPSRFSSGSGTDFTLTISNLQPEDFATYYCQQSYSTPRTFGHGTKVTVL(SEQ ID NO：10)；EIVLTQSPTTLSLSPGERATLSCRASQSVGRYLAWYQQRPGQAPRLLFDTSNRAPGVPARFSRGSGTLFTLTISSLEPEDSAVYFCQQRSSGLTFGGGTKVTVL(SEQ ID NO：12)；EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSSLAWYQQKPGQAPRLLYGTSNRATGIPDRFSSGSGTHFTLTINRLEPGDFAVYYCQQYGSSPRTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO：14)；DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLDWFQQRPGRAPHRLYGASSLQGGVPSRFSSGSGTEFTLTISGLQPEDFATYYCLQHHTYPRTFGLGTKVTVL(SEQ ID NO：16)；EIVMTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSVGTSLAWYQQKPGQAPRLLYDASNRATGISARFSSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRYNWPRTFGGGTKVTVL(SEQ ID NO：18)；ETTLTQSPATLSVSPGERATFSCRASQSVSNNLAWYQQKPGQAPRLLYGASSRTTGIPDRFSSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDTSPRTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO：20)；QSVVTQPPSVSAAPGQRVTISCSGSSYNIGENSVSWYQQLPGTAPKLLYGNDKRPSGIPDRFSSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSNLRASVFGGGTKVTVL(SEQ ID NO：22)；ETTLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRNNLAWYQQRPGQAPRLLYGASTRATGIPARFSSGSGTDFTLTISSLQVEDVAVYYCQQYYTTPKTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO：24)；EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVAISGSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDEPRSVSGLRGVVDSWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO：70)；QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVAISGSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGTDMEVWGKGTTVTVSS(SEQ ID NO：71)；QLQLQESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVAISGSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGKGGSSGYDHPDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：72)；QLQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVAISGSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNSLYLQMNSLGAEDTAVYYCARSWSGSSYGGDLDSWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：73)；QVQLVESGGGLIKPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVAISSSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCVREEYRCSGTSCPGAFDIWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：74)；EVQLVESGGTLVQPGGSLRLSCAASGFTFINYAMSWVRQAPDKGLDWVTISNNGGATYYADSVKGRFTSRDNSNNTLYLQMNSLRPDDTAVYYCAKGPINTGRYGDWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：75)；QVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCAASGFAFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVAISGGGDHTYYADSVKGRFTSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEGMVRGVSSAPFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：76)；EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVGISGSGASTYYADSVKGRFTSRDNSKNTLYLQMNSLRAGDTALYYCARQSITGPTGAFDVWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：77)；QLQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWFRQAPGKGLEWVFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTSRDDSKSIAYLQMNSLRAEDTAMYYCARRAKDGYNSPEDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：78)；QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMTWVRQAPGKGLEWVRIKTKTDGGTTDYAAPVKGRFTSRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDRDHSSGSWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：79)；DVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCTASGFPFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVRITSKTDGGTTDYVAPVKGRFTSRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDQANAFDIWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：80)；QMQLVQSGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTVSSSRMSWFRQAPGMGLEWVVIYSGGSTYYADSVRGRFSSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALYYCAREREGAVTREDWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：81)；QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWVRQAPGKGLEWVFIYSGGSTYYADSVKGRFTSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARESRVGGGAFDIWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：82)；和QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIVDGYAMHWVRQAPGQGLEWVVTNNGGSTSYADSVKGRFTSRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARQSITGPTGAFDIWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：83)，条件是所述序列保留了常规和非常规二硫键，并且其中构成CDR1、CDR2和CDR3的残基可以是任意合适的序列。