[发明专利]在同一多糖链的4位或6位生物技术硫酸化的硫酸软骨素及其制备方法

摘要

本发明公开了自未硫酸化的软骨素骨架开始，经化学硫酸化，生产具有10-30kDa平均分子量(Mw)的硫酸软骨素的方法，所述未硫酸化的软骨素骨架经大肠杆菌(E.coli)菌株O5:K4:H4直接产生的荚膜多糖K4的酸水解得到或者由基因改造的大肠杆菌(E.coli)菌株直接生产。N-乙酰基-D-半乳糖胺残基4或6位的硫酸化同时发生于同一的多糖链中，模拟天然硫酸软骨素中观察到的硫酸化模式，其不同于用迄今描述的合成方法得到的硫酸化。

主权项

1.用于制备其中在同一多糖链中的所有N-乙酰基-D-半乳糖胺单元被随机地或者在4-位或6-位单硫酸化的硫酸软骨素钠盐的方法，所述方法包含下述步骤：a.将软骨素钠盐转化成其游离酸或其与选自四甲基铵、四乙基铵或四丁基铵的季铵阳离子的盐或者转化成吡啶盐或甲酯；b.在酸催化存在下，使步骤a)中得到的化合物与其中R选自氢、甲基、乙基或苯基并且R₁选自甲基或乙基的式RC(OR₁)₃的原酸酯反应，得到其中软骨素中存在的重复二糖单元具有式I结构的化合物，其中R、R₁如上文所定义；c.在吡啶或选自三乙胺或三异丙基乙胺的有机叔碱，以及4-二甲基氨基吡啶(DMAP)存在下，通过与其中R₂选自甲基、乙基或丙基的式(R₂CO)₂O的酸酐反应而保护前面步骤中获得的化合物的葡糖醛酸单元的2’和3’位羟基，得到其中软骨素中存在的重复二糖单元具有式II结构的化合物，其中，R、R₁和R₂如上文所定义；d.用水溶性有机酸使步骤c)中得到的产物中存在的原酸酯官能团重排，得到酯衍生物，在该酯衍生物中，多糖中的重复GalNAc单元由具有式IIIa或IIIb的三酰基衍生物构成；其中，R和R₂如上文所定义；e.将步骤d)中得到的化合物单-硫酸化，然后除去先前步骤中得到的化合物IIIa和IIIb中存在的O-酰基基团。