[发明专利]丝状真菌中多个基因拷贝的同时位点特异性整合无效
| 申请号： | 201280025301.9 | 申请日： | 2012-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN103562391A | 公开（公告）日： | 2014-02-05 |
| 发明（设计）人： | 宇田川裕晃 | 申请（专利权）人： | 诺维信公司 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 龙淳;顾小曼 |
| 地址： | 丹麦*** | 国省代码： | 丹麦;DK |
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| 摘要： | 本发明涉及将两个或更多个拷贝的目标多核苷酸同时整合到真菌宿主细胞的染色体中的方法，该染色体包括至少两对位点特异性重组酶的识别序列，每对识别序列位于驻留阴性选择标记的两侧；对细胞转化携带侧翼也是识别序列的目标基因的构建体，以确保在重组酶短暂表达之后的双交换事件，接着选择所有阴性选择标记都被切除的细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 丝状 真菌 中多个 基因 拷贝 同时 特异性 整合 | ||
【主权项】：
一种用于将两个或更多个拷贝的目标多核苷酸同时整合到真菌宿主细胞的染色体中的方法，所述方法包括以下步骤：（a）提供在其染色体内包括至少两个整合位点的真菌宿主细胞，每个整合位点包括一对位点特异性重组酶的识别序列，每对识别序列位于驻留阴性选择标记的两侧；（b）向所述细胞中引入核酸构建体，所述核酸构建体包括一对所述位点特异性重组酶的识别序列，所述识别序列对位于所述目标多核苷酸的两侧；（c）在所述细胞中短暂表达所述位点特异性重组酶，借此染色体的识别序列对通过所述重组酶与所述核酸构建体的对应的识别序列对重组，从而使得在所述至少两个整合位点，所述染色体中的驻留阴性选择标记被切除而所述目标多核苷酸的拷贝整合到它的位置上，产生包括两个或更多个拷贝的整合到所述真菌宿主细胞的染色体中的所述目标多核苷酸的真菌宿主细胞。
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