[发明专利]核酸酶融合蛋白及其用途

摘要

提供了嵌合的核酸酶。具体而言，编码多肽的多核苷酸包含(i)至少包含源自归巢内切核酸酶的第一DNA结合结构域的第一模块，(ii)接头，和(iii)至少包含源自限制性内切核酸酶的第二DNA结合结构域和切割结构域的第二模块，其中嵌合的核酸酶仅与包含第一DNA结合结构域的DNA识别位点和第二DNA结合结构域的DNA识别位点的DNA在功能上相互作用，且其中所述切割结构域在嵌合的核酸酶结合后，切割特异性DNA切割位点内的DNA。还提供了包含多核苷酸的载体以及非人转基因生物。也提供了用于向非人生物的基因组中导入多核苷酸的方法。

主权项

编码多肽的多核苷酸，所述多肽由以下组成：(i)第一模块，所述第一模块由至少源自I‑SceI的第一DNA结合结构域组成，其中第一模块由以下组成：(a)SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或(b)携带一个以下改变的SEQ ID NO:1的氨基酸序列：(1)替换D44S；(2)替换D44S与D145A的组合；(3)替换D44N与D145A的组合；或(4)缺失5至9个C‑末端氨基酸；(5)替换D44S与缺失5至9个C‑末端氨基酸的组合；(6)替换D44S与D145A、缺失5至9个C‑末端氨基酸的组合；或(7)替换D44N与D145A、缺失5至9个C‑末端氨基酸的组合；(ii)接头；和(iii)第二模块，所述第二模块由至少源自PvuII的第二DNA结合结构域和切割结构域组成，其中第二模块由以下组成：(a)SEQ ID NO:2的氨基酸序列，或(b)携带一个以下改变的SEQ ID NO:2的氨基酸序列：(1)替换T46G；(2)替换H83A；(3)替换Y94F；(4)替换T46G与H83A的组合；(5)替换T46G与Y94F的组合；或(6)替换T46G与H83A和Y94F的组合；其中所述多肽仅与这样的DNA在功能上相互作用，所述DNA包含第一DNA结合结构域的DNA识别位点、第二DNA结合结构域的DNA识别位点和所述第一DNA结合结构域的DNA识别位点的反向互补序列，且其中在多肽结合后，所述切割结构域在特异性DNA切割位点内切割DNA，且其中对于功能上相互作用，所述多肽形成包含两个多肽单体的同源二聚体。