[发明专利]从混合物中分离感兴趣的寡核苷酸的方法

摘要

一种使用双相性流动相/固定相液‑液色谱系统从混合物中分离寡核苷酸的方法。第一流动相含有寡核苷酸且固定相含有可去除地结合目标寡核苷酸的交换剂物质。使该流动相在液‑液色谱仪中与该固定相流动接触以使该寡核苷酸在液体固定相中结合该交换剂物质。然后通过可将寡核苷酸从固定相置换入第二流动相的置换剂物质将该寡核苷酸从液体固定相置换入第二液体流动相。

主权项

用于从目标寡核苷酸和一种或多种杂质的混合物中分离目标寡核苷酸的方法，所述方法包括：提供包含第一液体流动相和液体固定相的双相性流动相‑固定相液‑液色谱系统，所述液体固定相含有可去除地结合目标寡核苷酸的至少一种交换剂物质，其中所述交换剂物质选自质子化形式的三(正辛基)甲基氯化铵和三(正癸基)甲基氯化铵的混合物、十六烷基三甲基溴化铵、甲基三辛基氯化铵、苯扎氯铵、苄基三甲基氯化铵、四丁基氯化铵和Amberlite LA2；使所述第一液体流动相在液‑液色谱仪柱中相对于所述液体固定相并与所述液体固定相接触的流动中携带包含10‑30个碱基的目标寡核苷酸以使所述目标寡核苷酸在所述液体固定相中结合所述交换剂物质；然后通过可将所述目标寡核苷酸从所述液体固定相置换入第二流动相的置换剂物质将所述目标寡核苷酸从所述液体固定相置换入第二液体流动相，所述第二液体流动相相对于所述液体固定相并与所述液体固定相接触流经所述柱，所述置换剂物质选自无机酸与碱金属的盐、糖精的去质子化形式、6‑羟基‑5‑[(4‑磺基苯基)偶氮]‑2‑萘磺酸二钠和(4E)‑3‑氧代‑4‑[(4‑磺酸基‑1‑萘基)亚肼基]萘‑2,7‑二磺酸三钠；其中所述第一液体流动相和第二液体流动相各自包含混合以下(a)‑(e)中任一组时形成的两个平衡液相中的一个相：(a)C_1‑6链烷酸C_1‑6烷基酯、C_1‑8链烷醇和水；(b)C_4‑8链烷醇和水；(c)C_1‑8链烷醇、二(C_1‑8烷基)酮和水；(d)二(C_1‑8烷基)酮和水；(e)二C_1‑6烷基醚或C_4‑10环醚、C_1‑8链烷醇和水，在所述液体流动相中水为主要成分；且所述液体固定相包含如此形成的两个平衡液相中的另一相，其中水为次要成分；其中所述液体流动相具有7‑14的pH。