[发明专利]JAK2的突变分析

摘要

本发明描述了对JAK2中的突变的测定。所述测定利用使用优先与野生型等位基因杂交的阻断探针进行的突变等位基因的选择性扩增。然后使用相同的探针来检测野生型序列的存在或不存在。不需要预先知晓具体的突变体序列。

主权项

检测在具有至少第一突变体和野生型等位基因的JAK2基因中的基因座不存在野生型等位基因的方法，所述方法包括：a)提供反应混合物，其包含：i)样品，所述样品包含代表JAK2基因的至少一部分的核酸；ii)寡核苷酸探针，其与突变体等位基因杂交的解链温度(Tm)低于其与野生型等位基因杂交的解链温度；iii)用于核酸扩增的成对寡核苷酸引物，所述引物与所述样品中的所述核酸在寡核苷酸探针结合位点侧翼的第一和第二位点杂交；其中引物：样品的Tm高于探针：突变体等位基因的Tm；b)保持所述反应混合物在所述探针：突变体等位基因的Tm与所述探针：野生型等位基因的Tm之间的温度，以使所述探针优先与所述野生型等位基因杂交；c)对所述反应混合物进行热循环扩增，所述扩增包括解链阶段、退火阶段和延伸阶段，其中所述延伸阶段和退火阶段的温度在所述探针：突变体等位基因的Tm与所述探针：野生型等位基因的Tm之间，以使所述探针在这些阶段与所述野生型等位基因杂交；由此扩增所述突变体等位基因；和d)在等于或低于所述探针：突变体等位基因的Tm的温度检测所述探针与所述样品的杂交；在等于或低于所述探针：野生型等位基因的Tm的更高的温度检测所述探针与所述样品的杂交；并且比较二者；由此检测所述野生型等位基因的存在或不存在。